DNA mit 3′‐5′‐Disulfid‐Verknüpfung – schnelle chemische Ligation durch isosteren Ersatz
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DNA mit 3′‐5′-Disulfid-Verknüpfung – schnelle chemische Ligation durch isosteren Ersatz
DOI：
10.1002/ange.201310644
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发表时间：
2014
影响因子：
--
通讯作者：
G. V. Kiedrowski
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Volker Patzke;J. S. Mccaskill;G. V. Kiedrowski
本文介绍了一种新的寡核苷酸、肽和杂交寡核苷酸类似物的合成方法，即生物化学酶寡核苷酸的化学连接法，并将其与肽、杂交寡核苷酸结合，即PNA结合。本文以5′-或3′-巯基-二脱氧核苷为原料，进行了寡核苷酸的固相合成。3′-5′-二硫键与3′-5′-磷酸二酯键的化学连接。在一种检查方法下，我们需要在Sekunden的大范围内使用Halbwertszeiten进行Schnellsten结扎。但是，DNA修饰和3′-5′-定位激活剂不能有效地进行模板连接。温度对模板连接的影响会增强。
Die Bemuhungen, die chemische Ligation von Oligonukleotiden ohne biochemische Enzyme zu etablieren, haben zu einer Vielzahl an synthetischen Analoga gefuhrt und damit die Oligomer-Ligation um neue Oligonukleotide, Peptide und Hybride, wie PNA, bereichert.1 Wichtigste Anforderungen an potenzielle PCR-freie Diagnosewerkzeuge sind eine schnelle templatierte chemische DNA-Ligation mit hoher Paarungsselektivitat, sowie eine empfindliche Detektionsmethode. Hier berichten wir uber eine Oligonukleotid-Festphasensynthese von 5′- oder 3′-Mercapto-didesoxynukleotiden. Die chemische Ligation liefert 3′-5′-Disulfid-Bindungen anstelle der 3′-5′-Phosphordiester-Bindung. Unter Verwendung einer Fluoreszenzmethode beschreiben wir eine der schnellsten Ligationsreaktionen mit Halbwertszeiten in der Grosenordnung von Sekunden. Durch die Wahl der DNA-Modifikation und der 3′-5′-Orientierung der Aktivierung wird die nicht templatierte Ligation effektiv unterdruckt. Der Temperatureinfluss auf die templatierte Ligation wir aufgezeigt.
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