In vitro inhibition of feline coronavirus replication by small interfering RNAs.
In vitro inhibition of feline coronavirus replication by small interfering RNAs.
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DOI：
10.1016/j.vetmic.2011.01.023
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发表时间：
2011-06-02
影响因子：
3.3
通讯作者：
Norris JM
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
McDonagh P;Sheehy PA;Norris JM
猫冠状病毒(FCoV)强毒生物型感染可导致猫传染性腹膜炎(FIP)，这是一种典型的致命免疫介导性疾病，目前尚无有效的抗病毒治疗方法。在这项研究中，我们证明了小干扰RNA(SiRNA)介导的RNA干扰(RNAi)能够抑制FCoV强毒株FIPV WSU 79-1146在永生化猫细胞系中的复制。针对口蹄疫病毒基因组四个不同区域的八个合成siRNA的小组进行了抗病毒效果测试。通过细胞内病毒基因组和信使RNA的qRT-PCR，细胞外病毒的TCID50感染力测定和病毒蛋白表达的直接IFA来确定疗效。所有siRNAs在体外均显示对病毒复制的抑制作用。针对未翻译的5‘前导序列(L2)和核衣壳基因(N1)的两个最有效的siRNAs导致细胞外病毒滴度下降95%。对这两个siRNA的进一步鉴定证明了它们在低浓度和高病毒负荷挑战的细胞中的有效性。综上所述，这些发现为RNAi在治疗FIP中的潜在治疗应用提供了重要信息。
Infection with virulent biotypes of feline coronavirus (FCoV) can result in the development of feline infectious peritonitis (FIP), a typically fatal immune mediated disease for which there is currently no effective antiviral treatment. In this study we demonstrate the ability of small interfering RNA (siRNA) mediated RNA interference (RNAi) to inhibit the replication of virulent FCoV strain FIPV WSU 79-1146 in an immortalised feline cell line. A panel of eight synthetic siRNAs targeting four different regions of the FCoV genome were tested for antiviral effects. Efficacy was determined by qRT-PCR of intracellular viral genomic and messenger RNA, TCID50 infectivity assay of extracellular virus, and direct IFA for viral protein expression. All siRNAs demonstrated an inhibitory effect on viral replication in vitro. The two most effective siRNAs, targeting the untranslated 5′ leader sequence (L2) and the nucleocapsid gene (N1), resulted in a >95% reduction in extracellular viral titre. Further characterisation of these two siRNAs demonstrated their efficacy when used at low concentrations and in cells challenged with high viral loads. Taken together these findings provide important information for the potential therapeutic application of RNAi in treating FIP.
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靶向与SARS相关冠状病毒的结构和复制酶基因的siRNA的动力学和协同作用。
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Kung HF
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Li T;Zhang Y;Fu L;Yu C;Li X;Li Y;Zhang X;Rong Z;Wang Y;Ning H;Liang R;Chen W;Babiuk LA;Chang Z
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Masters PS
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