Light-Activated Proteomic Labeling via Photocaged Bioorthogonal Non-Canonical Amino Acids.
Light-Activated Proteomic Labeling via Photocaged Bioorthogonal Non-Canonical Amino Acids.
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DOI：
10.1021/acschembio.7b01023
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发表时间：
2018-03-16
影响因子：
4
通讯作者：
DeForest CA
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Adelmund SM;Ruskowitz ER;Farahani PE;Wolfe JV;DeForest CA
这项工作介绍了光激活生物正交非典型氨基酸标签(LaBONCAT)，作为一种选择性地标记、分离和鉴定组织培养中用户定义区域新合成的蛋白质的方法。通过光笼化L-叠氮高丙氨酸(AHA)，阻止代谢并入蛋白质。笼子里的化合物在培养中保持稳定长时间，但可以通过光化学快速释放，并通过空间控制按需释放。在定向光照下，未定位的氨基酸可用于局部翻译，从而通过生物正交连接实现下游蛋白质组的询问。利用AHA氨基酸侧链上存在的反应性叠氮部分，我们证明了新合成的蛋白质可以被提纯用于定量蛋白质组学，或者通过一个新的时空控制水平在合成组织中可视化。通过揭示蛋白质在活样本中何时何地被翻译，我们预计laBONCAT将有助于了解复杂蛋白质相关疾病的进展。
This work introduces light-activated bioorthogonal non-canonical amino acid tagging (laBONCAT) as a method to selectively label, isolate, and identify proteins newly synthesized at user-defined regions in tissue culture. By photocaging L-azidohomoalanine (Aha), metabolic incorporation into proteins is prevented. The caged compound remains stable for many hours in culture, but can be photochemically liberated rapidly and on demand with spatial control. Upon directed light exposure, the uncaged amino acid is available for local translation, enabling downstream proteomic interrogation via bioorthogonal conjugation. Exploiting the reactive azide moiety present on Aha’s amino acid side chain, we demonstrate that newly synthesized proteins can be purified for quantitative proteomics or visualized in synthetic tissues with a new level of spatiotemporal control. Shedding light on when and where proteins are translated within living samples, we anticipate that laBONCAT will aid in understanding the progression of complex protein-related disorders.
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影响因子：
15
作者：
Szychowski J;Mahdavi A;Hodas JJ;Bagert JD;Ngo JT;Landgraf P;Dieterich DC;Schuman EM;Tirrell DA
通讯作者：
Tirrell DA
影响因子：
3.2
作者：
Beatty, Kimberly E.;Fisk, John D.;Smart, Brian P.;Lu, Ying Ying;Szychowski, Janek;Hangauer, Matthew J.;Baskin, Jeremy M.;Bertozzi, Carolyn R.;Tirrell, David A.
通讯作者：
Tirrell, David A.
DOI：
10.1073/pnas.0707090104
发表时间：
2007-10-23
影响因子：
11.1
作者：
Baskin, Jeremy M.;Prescher, Jennifer A.;Bertozzi, Carolyn R.
通讯作者：
Bertozzi, Carolyn R.
影响因子：
3.6
作者：
Bryant, SJ;Nuttelman, CR;Anseth, KS
通讯作者：
Anseth, KS
DOI：
10.1073/pnas.0601637103
发表时间：
2006-06-20
影响因子：
11.1
作者：
Dieterich, Daniela C.;Link, A. James;Schuman, Erin M.
通讯作者：
Schuman, Erin M.