Protocol for selecting single human pluripotent stem cells using a modified micropipetter.
Protocol for selecting single human pluripotent stem cells using a modified micropipetter.
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使用改良的微量移液器选择单个人多能干细胞的方案。
DOI：
10.1016/j.xpro.2023.102629
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发表时间：
2023-12-15
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Niu, Wei
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Mojica-Perez, Sandra P.;Stokes, Kyle;Jaklic, Daniel C.;Jahagirdar, Sheetal;Uhler, Michael;Parent, Jack M.;Niu, Wei
单细胞克隆选择是产生同质多能干细胞群体的关键步骤。在这里，我们提出了一个协议，重新使用通常用于体外受精的STRIPPER微量移液器，挑选单个干细胞。我们描述了工具和试剂制备、单细胞挑选和集落传代的步骤。然后，我们详细的放大和分析程序。我们的方案不需要细胞分选，并产生具有超过50%存活率的同质克隆培养物。有关本方案使用和执行的完整详细信息，请参见Deng等人。hPSC单细胞选择的详细分步指南使用STRIPPER微量移液器分离单个hPSC细胞分选和无连续稀释方法生成同质hPSC克隆出版商说明：进行任何实验方案都需要遵守当地机构的实验室安全和伦理指南。单细胞克隆选择是产生同质多能干细胞群体的关键步骤。在这里，我们提出了一个协议，重新使用通常用于体外受精的STRIPPER微量移液器，挑选单个干细胞。我们描述了工具和试剂制备、单细胞挑选和集落传代的步骤。然后，我们详细的放大和分析程序。我们的方案不需要细胞分选，并产生具有超过50%存活率的同质克隆培养物。
Single-cell clonal selection is a critical procedure for generating a homogeneous population of human pluripotent stem cells. Here, we present a protocol that repurposes the STRIPPER Micropipetter, normally used for in vitro fertilization, to pick single stem cells. We describe steps for tool and reagent preparation, single-cell picking, and colony passaging. We then detail procedures for amplification and analysis. Our protocol does not require cell sorting and produces homogenous clonal cultures with more than 50% survival rate. For complete details on the use and execution of this protocol, please refer to Deng et al. Detailed step-by-step guide for single-cell selection of hPSCs Isolation of single hPSC using the STRIPPER Micropipetter Cell sorting and serial-dilution-free approach for generating homogeneous hPSC clones Publisher’s note: Undertaking any experimental protocol requires adherence to local institutional guidelines for laboratory safety and ethics. Single-cell clonal selection is a critical procedure for generating a homogeneous population of human pluripotent stem cells. Here, we present a protocol that repurposes the STRIPPER Micropipetter, normally used for in vitro fertilization, to pick single stem cells. We describe steps for tool and reagent preparation, single-cell picking, and colony passaging. We then detail procedures for amplification and analysis. Our protocol does not require cell sorting and produces homogenous clonal cultures with more than 50% survival rate.
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