The role of calcium signalling in the establishment of compatible Colletotrichum graminicola interactions

钙信号传导在建立相容的炭疽菌相互作用中的作用

基本信息

项目摘要

Calcium (Ca2+) is a pivotal second messenger in animals, plants, and fungi, but its role in the fungal infection process is poorly understood. The aim of this project is to elucidate the role of Ca2+ signalling in the establishment of compatible interactions by Colletotrichum graminicola. We will identify candidate genes for components of the Ca2+ signalling machinery by bioinformatic analysis of the C. graminicola genome sequence. Using a targeted deletion approach, we will knock out identified candidate genes and determine the effect of knock out on fungal pre- and post-penetration development. Individual Ca2+ signals in the C. graminicola infection process will be identified by transforming the fungus with a codon-optimised aequorin Ca2+reporter. Using luminometry and photon imaging, we will determine at what stages of the interaction and in which cell types Ca2+ signals occur. Effects of the deletion of candidate genes on those Ca2+ signals will be determined. To characterise the identified Ca2+ signals with an increased spatio-temporal resolution, we will employ the ratiometric imaging of Ca2+-dependent cameleon fluorescence. The function of proteins displaying a role in Ca2+signalling and pathogenicity will be further examined by subcellular localisation and heterologous expression in yeast. The knowledge gained in this project will not only advance our understanding of Ca2+-dependent processes leading to the formation of a compatible interaction, but will also provide novel targets for the development of antifungal agents.
钙(Ca~(2+))是动物、植物和真菌中的关键第二信使,但对其在真菌感染过程中的作用知之甚少。本项目的目的是阐明钙离子信号在小麦炭疽菌建立亲和互作中的作用。我们将通过对稻瘟病菌基因组序列的生物信息学分析来确定参与钙信号机制的候选基因。使用有针对性的缺失方法,我们将敲除已识别的候选基因,并确定敲除对真菌穿透前和穿透后发育的影响。通过用密码子优化的aequorin钙离子报告基因转化真菌,可以识别禾谷镰刀菌感染过程中的单个钙信号。利用发光测量和光子成像,我们将确定在相互作用的哪些阶段以及在哪些细胞类型中出现钙信号。候选基因的缺失对这些钙信号的影响将被确定。为了用更高的时空分辨率来表征识别出的钙信号,我们将使用钙依赖的卡梅隆荧光的比率成像。在Ca~(2+)信号和致病性中发挥作用的蛋白质的功能将通过在酵母中的亚细胞定位和异源表达来进一步检验。这个项目所获得的知识不仅将促进我们对钙依赖过程的理解,导致相容相互作用的形成,而且还将为抗真菌药物的开发提供新的靶点。

项目成果

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