Herstellung eines humanen L1-Retrotransposons, welches ausschließlich in definierte, sichere Bereiche des humanen Genoms integriert

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Das mobile genetische Element TRE5-A aus Dictyostelium discoideum integriert immer 48±2 bp oberhalb von tRNA-Genen in sichere Bereiche des extrem kompakten Genoms. Wir konnten zeigen, dass diese Integrationsspezifität durch eine Protein-Protein-Interaktion zwischen dem ORF1p des TRE5-A Elementes und der TBP-Untereinheit des Polymerase-III Transkriptionsfaktors TFIIIB hergestellt wird. Die Interaktionsflächen konnten wir auf 18 bzw. 46 Aminosäuren eingrenzen. Mit Hilfe der Zinkfinger Technologie ist es heutzutage möglich, in vivo Proteine an vorhersagbare genomische DNA Sequenzen binden zu lassen. In dem beantragten Projekt möchte ich diesen spezifischen Integrationsmechanismus mit der Zinkfingertechnologie kombinieren und zusammen mit den bisherigen Erkenntnissen über das humane mobile genetische Element L1 nutzen. Dazu möchte ich ein L1 Element analog zur natürlichen Situation bei der spezifischen TRE5-A Integration über eine Protein-Interaktion zielgerichtet im humanen Genom mobilisieren. Später soll dieser Mechanismus genutzt werden können, um Gentherapie Vektoren sicherer zu machen.