Bispezifische Intra-diabodies gegen die Integrine avß3, avß1 und avß5 als Inhibitoren der Angiogenese

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Wissenschaftliches Ziel dieses Projekts ist es, bifunktionelle, tetravalente Intradiabodies für den phänotypischen Knockout der Integrine ¿vß3, ¿vß5, und ¿5ß1 herzustellen. Dazu werden mittels Phage-Display spezifische und hochaffine Antikörper gegen die Integrine ¿vß3, ¿vß5, und ¿5ß1 selektiert, um dann mittels single-chain Antikörper Fragmenten (scFv) bispezifische und tetravalente Intradiabodies zu klonieren. Intradiabodies können gezielt die Funktion eines Proteins ausschalten. Mit Hilfe dieser Intradiabody-Konstrukte, die im endoplasmatischen Retikulum (ER) zurückgehalten werden, soll die Funktion der Integrine ¿vß3, ¿vß5, und ¿5ß1 einzeln, simultan und in verschiedenen Kombinationen gehemmt werden. Dadurch sollen Einblicke in die Funktion sowie Erkenntnisse über die physiologische und pathologische Relevanz dieser Integrine in der Angiogenese gewonnen werden. Intradiabodies sind herkömmlichen scFv Intrabodies bezüglich Halbwertszeit, Dauer des funktionellen Knockouts, sowie der Möglichkeit des ¿double targeting¿ überlegen. Ausserdem erlauben sie in einem fortwährenden Prozess die regulatorischen Mechanismen der Zelle zu beobachten und zu analysieren, ohne die artifizielle Situation eines klassischen Knockouts, da das natürliche Gleichgewicht der Zelle nicht gestört wird. So sollten wissenschaftliche Aussagen bezüglich Funktion, Relevanz und Interaktion der Integrine ¿vß5, ¿vß3, und ¿5ß1 (Integrin crosstalk) möglich sein, und die Diskrepanz der Ergebnisse zwischen Integrin Knockout Mäusen und den Ergebnissen die mit Integrinhemmenden Antikörpern erzielt wurden, geklärt werden können. Diskrepant ist, dass Antikörper gegen ¿vß3 und ¿vß5 die Angiogenese blockieren, während hingegen Knockout Mäuse (ß3-, ß3/ß5-) eine verstärkte Angiogenese und Tumorwachstum zeigten. Um die Funktion/Interaktion der Integrine während der Angiogenese in vivo beurteilen zu können, werden die generierten und charakterisierten Intradiabodies an verschiedenen Tumormodellen auch umfassend in vivo evaluiert werden.