Assembly of photosystem I in thylakoid membranes

类囊体膜中光系统 I 的组装

基本信息

项目摘要

Photosystem I (PSI) is one of the largest and most intricate macromolecular machineries in nature. While the structure of PSI has been resolved in great detail, very little is known about how the complex is put together from more than a dozen protein subunits and more than 200 pigments and other co-factors. In the current funding period, we have (i) developed a new biochemical approach that has led to the discovery of two intermediate complexes in PSI assembly of seed plants, (ii) set up in vivo tagging and affinity purification approaches that have yielded a number of interesting candidate proteins for new components of the PSI-assembling machinery, and (iii) designed a new time-resolved system to study the sequence of events in PSI assembly of the green algal model Chlamydomonas reinhardtii. We now plan to build upon this work and (i) functionally characterize the novel putative PSI assembly factors we have isolated, (ii) determine their precise role in the PSI assembly process, and (iii) use the established inducible PSI knock-down and recovery system in Chlamydomonas to biochemically resolve individual steps in PSI assembly. The ultimate goals of the research proposed here are to elucidate the molecular structure of the PSI-assembling machinery and determine the functions of its components, establish an assembly map for PSI that provides a complete picture of the spatial and temporal sequence of events in the assembly process, and elucidate the evolution of the assembly machinery in relation to the evolution of PSI structure and thylakoid morphology.
光系统I(PSI)是自然界中最大和最复杂的大分子机器之一。虽然PSI的结构已经被详细解析,但人们对这种复合物是如何由十几个蛋白质亚基和200多种色素和其他辅因子组合在一起的知之甚少。在当前的资助期内,我们已经(i)开发了一种新的生物化学方法,导致在种子植物的PSI组装中发现了两种中间复合物,(ii)建立了体内标记和亲和纯化方法,为PSI组装机制的新组分产生了许多有趣的候选蛋白质,(iii)设计了一个新的时间分辨系统来研究绿色藻类模式莱茵衣藻PSI组装中的事件序列。我们现在计划在这项工作的基础上,(一)功能特性的新推定PSI组装因子,我们已经分离,(二)确定其在PSI组装过程中的确切作用,和(三)使用建立诱导PSI敲低和恢复系统在衣原体生化解决PSI组装的各个步骤。本研究的最终目标是阐明PSI组装机制的分子结构并确定其组成部分的功能,建立PSI组装图,提供组装过程中事件的时空序列的完整图像,并阐明组装机制的进化与PSI结构和类囊体形态的进化之间的关系。

项目成果

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