睡眠と覚醒状態における匂いの脳内表現の差異とそのメカニズムの解明

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本年度は、昨年度に構築した、二光子顕微鏡下でショウジョウバエ成虫の嗅覚回路の活動と個体の行動を同時に計測するシステムを用いて、嗅覚二次中枢であるキノコ体に属する約2000個全ての主要神経細胞（ケニオン細胞）の神経活動を、運動と安静、そして睡眠と覚醒状態において計測した。より具体的には、全ケニオン細胞を標識するOK107-Gal4系統を用いてカルシウム指示薬であるGCaMP6を遺伝学的に発現させ、個々の細胞体における蛍光強度を測定した。データ解析に関しては、これまでは、複数試行のデータを用いて有意な匂い応答を抽出するアルゴリズムを用いていたが、単一試行からでも抽出できるよう改変した。その結果、ベースラインの蛍光強度と匂い応答は、運動と安静状態で大きな差は認められなかった。その一方で、睡眠と覚醒状態では有意な差が認められた。この変化は実験に用いた匂いの種類に依らず観察された。しかしながら、デーコーディングの手法を用いたところ、匂いの種類の情報は睡眠と覚醒状態で同様に解読することができたため、双方の状態において匂いを弁別するために十分な情報がケニオン細胞総体に表現されていることが示唆された。また、睡眠状態でより多くのデータを取得できるように、断眠のための様々なプロトコルの構築を試みた。より長い時間睡眠状態で過ごすショウジョウバエの遺伝的背景の探索も行った。今後の計画を遂行する上で、効率を上げることにつながると期待される。