抗体－薬物複合体を固液界面で立体選択的に合成・高純度化するクロマトグラフィー

在固液界面立体选择性合成和高度纯化抗体药物复合物的色谱法

• 批准号: 21K04793
• 负责人: 吉本 則子
• 金额: $ 2.58万
• 依托单位: Yamaguchi University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K04793/
• 关键词: antibody drug conjugate; イオン交換クロマトグラフィー; 疎水クロマトグラフィー; 抗体薬物複合体; antibody; chromatography

抗体タンパク質に分子量1000～10000のPEGをスペーサーとして導入し、モデル薬物としてフルオレセインを用いて、抗体薬物複合体(ADC)の合成を実施し、今年度は下記の検討を実施した。1. 抗体薬物複合体の薬理活性は、薬物修飾数(DAR)に依存して変化することが知られており、DARの分析やDARごとに分離されることが望ましい。タンパク質結合後の薬物数を分光学的に解析するためには、結合後のモル吸光係数を事前に知る必要がある。しかし、薬物として用いられる化学物の多くは、周辺環境によって、吸収特性が変化する可能性がある。本研究で用いたフルオレセインは、その吸収特性は荷電性官能基の解離状態によって変化し、中性条件ではdiアニオン、monoアニオンが共存する。このため、各pHでdiアニオンとmonoアニオンの吸光係数を調べ、280、450、490 nmの3波長での吸光度の比と合わせて、抗体結合時の荷電状態と吸光特性を求める方法を構築し、これらに基づき、クロマトカラムから溶出される各ピーク中のADCのDARを決定した。2.分離基材としては、前年度は、分析用の疎水クロマト担体を用いてきたが、今年度は、分取に用いられる粒子サイズが大きな疎水クロマト担体を用いて、分離の検討を行った。分取用の担体上では、ピーク幅のブロード化がみられたが、線状構造の疎水性リガンドを用いた場合、各溶出ピーク間の分離が向上し、1.2以上の分離度が達成できた。3. モデル薬物、スペーサー修飾モデル薬物のlogP値をそれぞれ求めた結果、スペーサー修飾薬物のlogP値はPEGの分子量が小さいの場合はむしろ大きくなる結果となったが、分子量5000以上のPEGではlogP値の低下が見られた。凝集試験の結果、logPの小さいスペーサー修飾薬物は凝集が低減された。

Antibody タ ン パ ク qualitative に molecular weight 1000 ~ 10000 の PEG を ス ペ ー サ ー と し て import し, モ デ ル 薬 content と し て フ ル オ レ セ イ ン を with い て, antibody 薬 complex (ADC) の synthetic を be し, under our は remember の beg を 検 be applied し た. 薬 content 1. Antibody complex の 薬 active は, 薬 content modification number (DAR) に dependent し て variations change す る こ と が know ら れ て お り, DAR の analysis や DAR ご と に separation さ れ る こ と が hope ま し い. タ ン パ ク qualitative combination の 薬 content several を spectroscopy analytical す に る た め に は, combination の モ ル absorptivity を に know beforehand る necessary が あ る. し か し, 薬 と し て in い ら れ る chemicals more than の く は, zhou 辺 environment に よ っ て, suck the character 収 が variations change す る possibility が あ る. This research で い た フ ル オ レ セ イ ン は, そ の 収 absorption features は charged sexual function base の dissociation state に よ っ て - し and neutral conditions で は di ア ニ オ ン, mono ア ニ オ ン が coexistence す る. <s:1> ため ため, each pHでdiアニ アニ <e:1> と とmonoアニ アニ <e:1> <e:1> each light absorption coefficient を adjust べ, 280, 450, 490 の 3 nm wavelength で の absorbance の close と わ せ て, antibody combining の charged state と absorbance characteristics を o め を る method constructing し, こ れ ら に base づ き, ク ロ マ ト カ ラ ム か ら dissolution さ れ る each ピ ー ク の ADC の in DAR を decided し た. 2. The separation of base material と し て は, before the annual は, analysis with の 疎 water ク ロ マ ト supporter を with い て き た が, our は, divide に with い ら れ る particle サ イ ズ が big き な 疎 water ク ロ マ ト supporter を with い て, separating の 検 line for を っ た. Divide with の supporter on で は, ピ ー ク picture の ブ ロ ー ド change が み ら れ た が, linear structure の 疎 water-based リ ガ ン ド を with い た occasions, the stripping ピ ー ク の separation between が し upwards, separating degree が reached more than 1.2 の で き た. 3. モ デ ル 薬, ス ペ ー サ ー modified モ デ ル 薬 content の logP numerical を そ れ ぞ れ o め た results, ス ペ ー サ ー modified 薬 content の logP numerical は PEG molecular weight の が small さ い の occasions は む し ろ big き く な る results と な っ た が, molecular weight of more than 5000 の PEG で は logP low numerical の が see ら れ た. The results of the agglutination test <s:1> show that the logP <s:1> is small さ さ スペ <s:1> サ サ サ <s:1> the agglutination が of the <s:1> modified drug is low された.

项目成果

PEGリンカー鎖長が抗体薬物複合体のクロマト分離に与える影響

PEG 连接链长度对抗体-药物偶联物色谱分离的影响

• 发表时间: 2022
• 作者: 森田 俊哉;吉本則子
• 通讯作者: 吉本則子

Continuous Protein Modification and Separation Process with Chromatography

连续蛋白质修饰和色谱分离过程

• DOI: 10.11301/jsfe.21601
• 发表时间: 2022
• 期刊: Japan Journal of Food Engineering
• 作者: 穴田康太;田島誉久;緋田安希子;加藤純一;Yoshimoto Noriko
• 通讯作者: Yoshimoto Noriko

抗体薬物複合体の分離に及ぼすPEGリンカー鎖長の影響

PEG 连接链长度对抗体-药物缀合物分离的影响

• 发表时间: 2022
• 作者: 森田 俊哉;吉本 則子
• 通讯作者: 吉本 則子

イオン交換クロマトグラフィーを用いたペプチド修飾アルブミンの分離

使用离子交换色谱法分离肽修饰白蛋白

• 发表时间: 2022
• 作者: 濵中 誠司;吉本 則子
• 通讯作者: 吉本 則子

疎水性相互作用クロマトグラフィーにおける抗体薬物複合体 溶出挙動のモデル解析

疏水相互作用色谱中抗体-药物偶联物洗脱行为的模型分析

• 发表时间: 2021
• 作者: 吉村 裕輔;吉本 則子
• 通讯作者: 吉本 則子