抗体－薬物複合体を固液界面で立体選択的に合成・高純度化するクロマトグラフィー

抗体タンパク質に分子量1000～10000のPEGをスペーサーとして導入し、モデル薬物としてフルオレセインを用いて、抗体薬物複合体(ADC)の合成を実施し、今年度は下記の検討を実施した。1. 抗体薬物複合体の薬理活性は、薬物修飾数(DAR)に依存して変化することが知られており、DARの分析やDARごとに分離されることが望ましい。タンパク質結合後の薬物数を分光学的に解析するためには、結合後のモル吸光係数を事前に知る必要がある。しかし、薬物として用いられる化学物の多くは、周辺環境によって、吸収特性が変化する可能性がある。本研究で用いたフルオレセインは、その吸収特性は荷電性官能基の解離状態によって変化し、中性条件ではdiアニオン、monoアニオンが共存する。このため、各pHでdiアニオンとmonoアニオンの吸光係数を調べ、280、450、490 nmの3波長での吸光度の比と合わせて、抗体結合時の荷電状態と吸光特性を求める方法を構築し、これらに基づき、クロマトカラムから溶出される各ピーク中のADCのDARを決定した。2.分離基材としては、前年度は、分析用の疎水クロマト担体を用いてきたが、今年度は、分取に用いられる粒子サイズが大きな疎水クロマト担体を用いて、分離の検討を行った。分取用の担体上では、ピーク幅のブロード化がみられたが、線状構造の疎水性リガンドを用いた場合、各溶出ピーク間の分離が向上し、1.2以上の分離度が達成できた。3. モデル薬物、スペーサー修飾モデル薬物のlogP値をそれぞれ求めた結果、スペーサー修飾薬物のlogP値はPEGの分子量が小さいの場合はむしろ大きくなる結果となったが、分子量5000以上のPEGではlogP値の低下が見られた。凝集試験の結果、logPの小さいスペーサー修飾薬物は凝集が低減された。

抗体タンパク質に分子量1000～10000のPEGをスペーサーとして導入し、モデル薬物としてフルオレセインを用いて、抗体薬物複合体(ADC)の合成を実施し、今年度は下記の検討を実施した。1. 抗体薬物複合体の薬理活性は、薬物修飾数(DAR)に依存して変化することが知られており、DARの分析やDARごとに分離されることが望ましい。タンパク質結合後の薬物数を分光学的に解析するためには、結合後のモル吸光係数を事前に知る必要がある。しかし、薬物として用いられる化学物の多くは、周辺環境によって、吸収特性が変化する可能性がある。本研究で用いたフルオレセインは、その吸収特性は荷電性官能基の解離状態によって変化し、中性条件ではdiアニオン、monoアニオンが共存する。このため、各pHでdiアニオンとmonoアニオンの吸光係数を調べ、280、450、490 nmの3波長での吸光度の比と合わせて、抗体結合時の荷電状態と吸光特性を求める方法を構築し、これらに基づき、クロマトカラムから溶出される各ピーク中のADCのDARを決定した。2.分離基材としては、前年度は、分析用の疎水クロマト担体を用いてきたが、今年度は、分取に用いられる粒子サイズが大きな疎水クロマト担体を用いて、分離の検討を行った。分取用の担体上では、ピーク幅のブロード化がみられたが、線状構造の疎水性リガンドを用いた場合、各溶出ピーク間の分離が向上し、1.2以上の分離度が達成できた。3. モデル薬物、スペーサー修飾モデル薬物のlogP値をそれぞれ求めた結果、スペーサー修飾薬物のlogP値はPEGの分子量が小さいの場合はむしろ大きくなる結果となったが、分子量5000以上のPEGではlogP値の低下が見られた。凝集試験の結果、logPの小さいスペーサー修飾薬物は凝集が低減された。