Development of nobel assay methods for miRNA and adenine methyltransferase using FRET

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申請者は、分析化学分野で広く使用されている蛍光共鳴エネルギー移動(FRET)のバックグランドを大幅に低下させる方法を見出し、それを応用したDNA中のシトシンをメチル化する酵素の活性測定法を開発している。本研究課題では、この方法をもとに、様々な疾患に関与するマイクロRNA(miRNA)およびエピジェネティクスに関与しているアデニンのメチル化/脱メチル化酵素の簡便で特異的かつ高感度な測定法の開発を目的としている。miRNAは、様々な生命現象と関わっており、さらに各種がんや心疾患、ウイルス感染症など、種々の疾患のバイオマーカーとしても注目されている。また、miRNA中のアデニンもメチル化されることが報告され、アデニンメチル化酵素についても、これら疾患との関連性が注目されている。しかし、これらの検出・測定法は、特別な機器や試薬、煩雑な操作が必要である。本課題の目的とする検出・測定法は、特別な機器や試薬を必要とせず、非常に簡便な測定法であり、生命科学や医療分野における汎用性の高い新たな解析ツールとなり得ると考える。これまでに、シトシンおよびアデニンメチル化酵素について、エピジェネティクス研究で使用されているメチル化塩基を認識して切断できる制限酵素とFRETを組み合わせた、新規活性測定法を開発した。現在、生体試料中の酵素活性が測定できるか調査中である。miRNA検出系については、miRNAの配列に特異的な蛍光検出法を開発できた。現在、検出感度を高めるための磁気マイクロビーズを使用した、miRNAの効率的な回収方法、および、蛍光検出の条件を検討中である。