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生細胞内でシャペロン活性を持つ自己集合性化合物の開発

在活细胞中开发具有伴侣活性的自组装化合物

基本信息

批准号：
21K05306
负责人：
安保真裕
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究課題では、変性タンパク質と共集合して小胞体ストレスによる細胞死を抑制する自己集合性化合物であるX441Aを同定し、誘導体の開発と作用メカニズムの解明を進めてきた。昨年度までの研究により、X441Aは正常タンパク質よりも変性タンパク質と共集合体を形成しやすいことが試験管内の実験により解明された。また、X441Aの生細胞における作用は、細胞のオートファジー・リソソーム過程が必要であることも示唆された。本年度は、X441Aの作用機序をさらに詳細に解明するために、X441Aと変性タンパク質が生細胞内で共集合することを実証した。生細胞イメージング実験を行うために、X441Aと緑色蛍光色素とを共有結合させた誘導体であるX441A-Fluを設計、開発した。変性タンパク質はユビキチン化されることが知られていることから、変性タンパク質のマーカーとして赤色蛍光タンパク質mRFPとユビキチンを融合させたmRFP-ubiquitinを用いた。共染色実験の結果、小胞体ストレス誘起剤であるツニカマイシンの存在下において、HEK293細胞の細胞内でX441A-FluとmRFP-ubiquitinの蛍光シグナルが空間的に一致し、これらが共局在している様子が観察された。さらに、青色のリソソームマーカーであるmtagBFP2-lysosome20との共染色実験によって、X441A-FluとmRFP-ubiquitinの共集合体がリソソームに局在していることが観察された。この結果により、X441Aと変性タンパク質の共集合体は、オートファジー・リソソーム過程によって分解されるというこれまでの結果が、生細胞イメージング実験からも支持された。

This research topic is to study the role of X441A in the development of molecular biology and molecular biology in the inhibition of cell death. The X441A was tested in the laboratory for the formation of a mass of natural gas. X441A is a biological cell that functions as a precursor to the development of cellular systems. This year, X441A's mechanism of action has been clarified in detail, and X441A's ability to integrate into cells has been demonstrated. X441A-Flu is designed and developed for the production of green fluorescent pigments. In the case of the red light, the mRFP is used as a mixture of the following: The results of co-staining, microcellular induction, and intracellular X441A-Flu and mRFP-ubiquitin in HEK293 cells were examined. In addition, the blue and blue co-dye assemblies of mtagBFP2-lysosome20 and X441A-Flu and mRFP-ubiquitin were found to be very sensitive. As a result, X441A has a variety of properties, such as the total number of aggregates, the number of products, and the number of products.