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マメ科植物プロテアーゼによる根粒窒素固定の制御

豆科植物蛋白酶控制根瘤固氮

基本信息

批准号：
21K05335
负责人：
下田宜司
金额：
$ 2.66万
依托单位：
National Agriculture and Food Research Organization
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K05335/
关键词：
マメ科植物根粒共生窒素固定根粒菌プロテアーゼ

项目摘要

本年度は、窒素固定に異常をきたすミヤコグサsym102変異体の原因遺伝子がコードするプロテアーゼの細胞内局在の解析を試みた。シロイヌナズナのオルソログに関する先行研究、および細胞内局在予測プログラムを用いた解析から、sym102がコードするプロテアーゼはミトコンドリアに局在すると考えられた。そこで、まずミヤコグサの根においてミトコンドリアを可視化するために、MitoTrackerによる染色を実施した。しかしながら、ミヤコグサの根全体において、ミトコンドリアのみをうまく染色することができなかった。次にGFP等との融合タンパク質を用いて、sym102の細胞内局在を解析した。sym102のC末端にGFPを連結した遺伝子を過剰発現プロモーター（カリフラワーモザイクウィルス35Sプロモーター）で発現するコンストラクトを作製した。同時に、ミトコンドリアに局在することが知られているシロイヌナズナのF1-ATPase γ-subunitのシグナルペプチドの下流にRFPを連結したコンストラクトを構築した。構築した2つのコンストラクトを毛状根形質転換により、野生型のミヤコグサの根で発現させた。その結果、sym102-GFPおよびF1-ATPase γ-subunit-RFPはともに明確なミトコンドリア局在を示した。同様の実験をsym102変異体でも実施したが、ミトコンドリアへの局在およびシグナルの分布の程度は野生型の場合と同様であった。

This year, we tried to analyze the cellular structure of the cell. A preliminary study of the relationship between the development of a novel drug and the development of a novel drug, a preliminary study of the relationship between the development of a novel drug and the development of a novel drug, a preliminary study of the relationship between the development of a novel drug and the development of a novel drug, and a preliminary study of the relationship between the development of a novel drug and the development of a novel drug. The color of MitoTracker can be seen in the background of MitoTracker. The whole body of the tree is covered with white and yellow. Next, GFP and other fusion proteins were used to analyze the intracellular structure of sym102. C-terminal GFP linkage is detected by the C-terminal GFP linkage and controlled by the C-terminal GFP linkage. At the same time, the structure of the F1-ATPase γ-subunit was established. 2. Hairy root morphology changes and wild-type hairy root development The results showed that sym102-GFP and F1-ATPase γ-subunit-RFP were clearly identified. In the case of the wild type, the same type is used.