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Elucidation of significance and regulatory mechanism of glucose-mediated protein Arg-phosphorylation of glucose-metabolizing enzymes

阐明葡萄糖介导的蛋白质Arg磷酸化葡萄糖代谢酶的意义和调节机制

基本信息

批准号：
21K05349
负责人：
小倉光雄
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Tokai University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

グルコース存在下でのahrC破壊株とmntR破壊株について、野生株を対照とした比較RNA-seq解析をN=4で実施した。その結果、ahrC株について、FDR, <0.05, log2[FC], 1の条件で、従来知られていたarg-boxを持つ8転写単位に加えて1176遺伝子を検出した。同じ条件でmntR株について、既知のマンガン輸送遺伝子7に加えて、1316遺伝子を検出した。予想していなかったが、ahrC制御候補遺伝子とmntR制御候補遺伝子は互いに3割程度重複していた。RNA-seq解析では往往にして偽陽性を標的遺伝子として検出してしまうことが知られているので、ahrC制御候補オペロンのプロモーターを15、mntR制御候補オペロンのプロモーターを19選び、両転写因子による制御を各プロモーターのlacZ fusionを作成・使用してグルコース存在下で検証したところ、全てについてその制御を確認した。なお14プロモーターについては、ahrC,　mntR両方で制御されていた。ahrCについては、カリウムイオンとマグネシウムイオン輸送に関わる遺伝子とヒスチジンなどのアミノ酸生合成遺伝子のプロモーターが含まれていた。また、mntRについては、鉄イオン輸送に関わる遺伝子とアルギニンなどのアミノ酸生合成遺伝子のプロモーターが含まれていた。両方ともspoIIEなどの胞子形成遺伝子をも制御していた。さらに精製AhrCとMntRタンパク質を用いて、これら転写因子が直接に上記の標的プロモーターに結合するか否かをEMSAにて検討した。その結果、AhrCについては新たに5プロモーター、MntRについては新たに12プロモーターについて直接の結合を観察した。

The RNA-seq analysis of ahrC and mntR strains in the presence of wild plants was carried out at N=4. Results, ahrC strain detection, FDR, <0.05, log2[FC], 1 condition, and knowledge of the arg-box to maintain 8 write units to add 1176 genes to detect. The same condition is mntR strain detection, known transmission gene 7 addition, 1316 gene detection I would like to add more information to the list. RNA-seq analysis often involves false positives, false positives.なお14プロモーターについては、ahrC, mntR両方で制御されていた。ahrC is the most important component of the system. It is the most important component of the system. For example, if the iron is not available, the iron is not available. If the iron is not available, the iron is not available. In addition to the above, it is also possible to control the growth of the offspring. In addition, the quality of AhrC and MntR can be improved by using EMSA. The results, AhrC