枯草菌σ^Dの多コピーproBによる転写後阻害とその阻害を回復させる遺伝子の単離

多拷贝 proB 对枯草芽孢杆菌 σ^D 的转录后抑制以及恢复这种抑制的基因的分离

• 批准号: 08760100
• 负责人: 小倉 光雄
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: Tokai University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08760100/
• 关键词: Bacillus subtilis; DNA結合タンパク質; sigma D; fla; che オペロン

枯草菌は菌体外に多量のプロテアーゼを生産分泌し、その制御は正のtwo-component制御系、DegS-Uによっており、さらに複数の制御因子が働いている。正の因子の一つDegRは、リン酸化DegUを安定化し、正のシグナルをプロテアーゼ遺伝子により強く伝達する。リン酸化型DegUが何らかの制御因子を介して、σ^Dに作用しDegR遺伝子発現を制御する現象を観察したので、トランスポゾンを用いた突然変異導入法によりこの制御分子の単離を試み、sud(suppressor of degR)と命名した変異株を得たので、その解析を目的とした。1.sud変異がσ^Dの構造遺伝子sigDを含むfla-cheオペロンの転写活性化を行っている可能性を検討した。sud変異とsigD-lacZを共存させてその発現を調べたところ、コントロールのsigD遺伝子発現に比較して約5倍程度高い発現が観察された。それゆえsud変異のdegR遺伝子発現に対する正の効果は、sigDの転写活性化によると考えられた。2.sud遺伝子を単離しその塩基配列を決定した。突然変異誘起に利用したトランスポゾンは選択に用いたsp耐性遺伝子と大腸菌で複製可能なoriを持っているので変異株の染色体DNAを制限酵素で切断後、リガーゼで処理し大腸菌に形質転換しトランスポゾン挿入点周囲のDNA約2600塩基対を単離した。プライマー伸長法とノーザンブロット法による解析で以下のことが判明した。sudは、2つのORFからなるオペロンで、上流ORFをsudK、下流ORFをsudLと命名した。SudKはGntR族、SudLはLacI-GalR族のDNA結合タンパク質にそれぞれ高い相同性を示した。degR遺伝子発現に影響するのはsudL ORFであり、sudK ORFの機能は不明であった。

Bacillus subtilis produces a large number of control factors in vitro, such as two-component control system, DegS-U control system, and multiple control factors. A positive factor is a negative factor, a negative factor is a negative factor, and a positive factor is a negative factor. The effect of the inhibitor on the expression of degR gene was investigated and analyzed. 1. To investigate the possibility of structural variation of sigD with fla-che selection and activation. The sigD gene expression is about 5 times higher than the sigD gene expression. The results of the sigD and sigD activation tests were compared with the results of the sigD and sigD activation tests. 2. The decision to allocate resources to the next generation The DNA of the mutant strain is restricted by enzyme cleavage, and then treated by enzyme cleavage. The DNA of the mutant strain is isolated by about 2600 bp. The following is an analysis of the length and width of the film. sud, 2 ORF, ORF sudK, ORF dL The DNA binding properties of GntR family and LacI-GalR family are shown in the following table. DegR gene expression affects the function of sudL ORF and sudK ORF.

项目成果

Hassan,A.K.M.,S.Moriya,M.Ogura,T.Tanaka,F.Kawamura and N.Ogasawara.: "Suppression of initiation defects of chromosome replication in Bacillus subtilis dnaA and oriC-deleted mutants by integration of a plasmid replicon into the chromosomes." J.Bacteriol.(i

Hassan，A.K.M.，S.Moriya，M.Ogura，T.Tanaka，F.Kawamura 和 N.Ogasawara.：“通过将质粒复制子整合到枯草芽孢杆菌 dnaA 和 oriC 缺失突变体中，抑制染色体复制的起始缺陷。

Ogura,M.and T.Tanaka.: "Expression of alkaline protease gene in Bacillus subtilis mutants that lack positive regulatory genes degR,degQ,senS,tenA,and proB" Biosci Biotech Biochem.61. 372-374 (1997)

Ogura，M. 和 T.Tanaka.：“缺乏正调控基因 degR、degQ、senS、tenA 和 proB 的枯草芽孢杆菌突变体中碱性蛋白酶基因的表达”Biosci Biotech Biochem.61。

Ogura,M.and T.Tanaka.: "Bacillus subtilis comK negatively regulates degR gene expression." Mol.Gen.Genet.(in press).

Ogura,M. 和 T.Tanaka.：“枯草芽孢杆菌 comK 负向调节 degR 基因表达。”

Ogura,M.and T.Tanaka.: "Bacillus subtilis degU acts as a positive regulator for comK expression" FEBS Lett.397. 173-176. (1996)

Ogura,M. 和 T.Tanaka.：“枯草芽孢杆菌 degU 作为 comK 表达的正调节因子”FEBS Lett.397。