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エクオール抱合代謝物がもたらす神経保護的活性物質としての新たな可能性

雌马酚缀合代谢物作为神经保护活性物质的新潜力

基本信息

批准号：
21K05457
负责人：
小原映
金额：
$ 2.58万
依托单位：
Kyorin University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

Equolは、daidzeinから腸内細菌により合成される化合物であり、エストロゲン作用だけでなく、神経保護作用を有するため、認知症予防効果の可能性が指摘されている。今年度は、まず組織中におけるEquol抱合代謝物の定量のため、検量線を作成した。血漿と脳における検量線は、0.19～78.64 ngの範囲において、r=0.9550以上の良好な直線性を得ることが出来た。結果、血漿100 uL中には、E-4’-G 2.7 ng、E-7-G 16.0 ng、E-4’-S 23.4 ng、E-7-S 36.7 ngが存在し、Equolは検出されなかった。現在脳およびその他の臓器の検量線および定量を検討中である。機器更新などで質量分析装置が使用出来ない期間があったため、R5年度計画であったEquol抱合代謝物の神経保護作用を検証するための細胞実験を先行して実施した。初代培養法として、まずC57BL/6マウス生後1～4日までの仔マウスの大脳を採取し、パパイン酵素処理したのち、Poly-D-lysineをコートしたフラスコに1×10^6個となるように播種した。5日後アストロサイトがコンフルエントになったことを確認し、200 rpmにて30分間振とうし、ミクログリアを回収した。この方法にてアストロサイトとミクログリアを分離し培養し、実験に用いた。これら培養細胞を用いることが出来るかの確認のため、LPS 1 ug/ｍLで24時間刺激させ、NO2-の生成を測定した。その結果アストロサイトとミクログリア共に、LPS刺激によるNO2-の生成が確認できた。このアストロサイトとミクログリアを用いて各抱合代謝物の神経保護作用を比較検討する予定である。

Equol, daidzein, and other compounds synthesized by intestinal bacteria may have neuroprotective effects and cognitive disorders. This year, the quantification of Equol complex metabolites in tissues was established. The plasma concentration range is 0.19~78.64 ng, r=0.9550 and the linearity is good. Results: E-4'-G 2.7 ng, E-7-G 16.0 ng, E-4'-S 23.4 ng, E-7-S 36.7 ng were present in plasma 100 uL, Equol was detected. Now, the measurement line of the other devices is too large to be used in the quantitative analysis. The machine updates the quality analysis device for the period of use, and the R5 annual plan is implemented in advance of the detection of the protective effect of the Equol complex metabolite 1~4 days after the birth of C57BL/6, the seeds of C57BL/6 were harvested and treated with enzymes. Poly-D-lysine was used for 1×10^6 seeds. After 5 days, the frequency of vibration was determined, and the frequency of vibration was determined at 200 rpm. The method of separation and purification is described in detail. Culture cells were stimulated with LPS 1 ug/mL for 24 hours and NO2-production was measured. The results showed that NO2-generation was confirmed by LPS stimulation. A comparative study of neuroprotective effects of these metabolites