エクオール抱合代謝物がもたらす神経保護的活性物質としての新たな可能性

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Equolは、daidzeinから腸内細菌により合成される化合物であり、エストロゲン作用だけでなく、神経保護作用を有するため、認知症予防効果の可能性が指摘されている。今年度は、まず組織中におけるEquol抱合代謝物の定量のため、検量線を作成した。血漿と脳における検量線は、0.19～78.64 ngの範囲において、r=0.9550以上の良好な直線性を得ることが出来た。結果、血漿100 uL中には、E-4’-G 2.7 ng、E-7-G 16.0 ng、E-4’-S 23.4 ng、E-7-S 36.7 ngが存在し、Equolは検出されなかった。現在脳およびその他の臓器の検量線および定量を検討中である。機器更新などで質量分析装置が使用出来ない期間があったため、R5年度計画であったEquol抱合代謝物の神経保護作用を検証するための細胞実験を先行して実施した。初代培養法として、まずC57BL/6マウス生後1～4日までの仔マウスの大脳を採取し、パパイン酵素処理したのち、Poly-D-lysineをコートしたフラスコに1×10^6個となるように播種した。5日後アストロサイトがコンフルエントになったことを確認し、200 rpmにて30分間振とうし、ミクログリアを回収した。この方法にてアストロサイトとミクログリアを分離し培養し、実験に用いた。これら培養細胞を用いることが出来るかの確認のため、LPS 1 ug/ｍLで24時間刺激させ、NO2-の生成を測定した。その結果アストロサイトとミクログリア共に、LPS刺激によるNO2-の生成が確認できた。このアストロサイトとミクログリアを用いて各抱合代謝物の神経保護作用を比較検討する予定である。