エクオール抱合代謝物がもたらす神経保護的活性物質としての新たな可能性

雌马酚缀合代谢物作为神经保护活性物质的新潜力

• 批准号: 21K05457
• 负责人: 小原 映
• 金额: $ 2.58万
• 依托单位: Kyorin University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K05457/
• 关键词: Equol; LC-MS/MS; Isoflavone; イソフラボン; Glucuronide; Sulfate; 抱合代謝物; エクオール; イメージングMS; 神経保護作用

Equolは、daidzeinから腸内細菌により合成される化合物であり、エストロゲン作用だけでなく、神経保護作用を有するため、認知症予防効果の可能性が指摘されている。今年度は、まず組織中におけるEquol抱合代謝物の定量のため、検量線を作成した。血漿と脳における検量線は、0.19～78.64 ngの範囲において、r=0.9550以上の良好な直線性を得ることが出来た。結果、血漿100 uL中には、E-4’-G 2.7 ng、E-7-G 16.0 ng、E-4’-S 23.4 ng、E-7-S 36.7 ngが存在し、Equolは検出されなかった。現在脳およびその他の臓器の検量線および定量を検討中である。機器更新などで質量分析装置が使用出来ない期間があったため、R5年度計画であったEquol抱合代謝物の神経保護作用を検証するための細胞実験を先行して実施した。初代培養法として、まずC57BL/6マウス生後1～4日までの仔マウスの大脳を採取し、パパイン酵素処理したのち、Poly-D-lysineをコートしたフラスコに1×10^6個となるように播種した。5日後アストロサイトがコンフルエントになったことを確認し、200 rpmにて30分間振とうし、ミクログリアを回収した。この方法にてアストロサイトとミクログリアを分離し培養し、実験に用いた。これら培養細胞を用いることが出来るかの確認のため、LPS 1 ug/ｍLで24時間刺激させ、NO2-の生成を測定した。その結果アストロサイトとミクログリア共に、LPS刺激によるNO2-の生成が確認できた。このアストロサイトとミクログリアを用いて各抱合代謝物の神経保護作用を比較検討する予定である。

Equol は, daidzein か ら intestinal bacteria に よ り synthetic さ れ る compound で あ り, エ ス ト ロ ゲ ン role だ け で な く, god 経 protection を す る た め possibility, cognitive disorder to prevent unseen fruit の が blame さ れ て い る. For this year, the <s:1> quantification <e:1> ため and 検 quantification lines を of におけるEquol conjugated metabolites in における and まず tissues were made as た た. Plasma と 脳 に お け る 検 line は, 0.19 ~ 78.64 ng の van 囲 に お い て, r = 0.9550 above の な good linearity を have る こ と が た. Results: In 100 uL of plasma, に に, 2.7 ng of E-4 '-G, 16.0 ng of E-7-G, 23.4 ng of E-4' -S, and 36.7 ng of E-7-S が were present, and Equol 検 検 was found to be されな されな った った. Now 脳およびそ <s:1> he has a 検 measurement line および quantification を検 in である. Machine update な ど で が quality analysis device using out な い during が あ っ た た め, R5 annual plan で あ っ た Equol looping metabolites の god 経 protection を 検 card す る た め の cells be 験 を first し て be applied し た. Early training curing と し て, ま ず C57BL / 6 マ ウ ス born after 1 ~ 4 ま で の seed マ ウ ス の big 脳 を し, パ パ イ ン enzyme 処 Richard し た の ち, Poly real - D - lysine を コ ー ト し た フ ラ ス コ に 1 x 10 ^ 6 と な る よ う に seeding し た. 5 ア ス ト ロ サ イ ト が コ ン フ ル エ ン ト に な っ た こ と を confirm し, 200 RPM に て 30 points between vibration と う し, ミ ク ロ グ リ ア を back 収 し た. <s:1> <s:1> method にてアストロサ にてアストロサ トと トと トと トと ログリアを ログリアを isolation of <s:1> culture <e:1>, laboratory に use of た た. こ れ ら culture cell を with い る こ と が out る か の confirm の た め, 1 ug/mL で 24 time LPS stimulation さ せ, determination of NO2 - の generate を し た. そ の results ア ス ト ロ サ イ ト と ミ ク ロ グ リ ア に, LPS stimulation に よ る NO2 - の generated が confirm で き た. The <s:1>, アストロサ, トと, トと, トと, and ログリアを were compared with each of the associated metabolites' <s:1> neuroprotective effects を to determine する.

项目成果

生体内におけるEquolおよびその抱合代謝物のLC-MS/MSを用いた一斉分析

使用 LC-MS/MS 同时分析雌马酚及其体内缀合代谢物

• 发表时间: 2023
• 作者: 長尾元嗣;浅井明;杉原仁;Claes B. Wollheim;及川眞一; Lena Eliasson;長尾元嗣;小原 映，髙津 博勝，石井 さなえ，島田 厚良， 岡田 洋二
• 通讯作者: 小原 映，髙津 博勝，石井 さなえ，島田 厚良， 岡田 洋二