RNP remodeling by RNA helicase UAP56

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真核細胞のmRNAは核内で合成された後、一群のRNA結合タンパク質とともにhnRNPと呼ばれる複合体を形成する。その後、核外輸送タンパク質因子群がmRNAに結合することによってmRNAは細胞質へ輸送される。mRNA核外輸送において、別種のU snRNAの核外輸送因子PHAXがmRNAに結合して、その結果、誤った経路で輸送される可能性が考えられた。我々は以前、PHAXのmRNA結合を防ぐ仕組みとして、hnRNP構成タンパク質因子であるhnRNPCのmRNAへの結合が重要であることを報告した。PHAXのmRNA結合の阻害後には、hnRNPCのmRNAからの解離がmRNA核外輸送に重要であることも示した。ただし、hnRNPCのmRNAからの解離の仕組みは不明である。当該年度では、解離の仕組みを明らかにする目的で、hnRNPCの活性に焦点を絞って解析を行った。スプリントライゲーション法を利用した試験管内RNA-タンパク質結合実験系を構築することによって、hnRNPCがmRNAの5'末端のキャップ構造から隙間なくRNAに結合すること、さらに、その結合にはキャップ結合タンパク質複合体CBCが必要であることを示した。また、アフリカツメガエル卵母細胞への顕微注入実験によって、生細胞においてhnRNPCの4量体形成がU snRNA核外輸送経路利用の抑制に重要であることを示した。以上の結果を国際雑誌Nucleic Acids Research誌で発表した。mRNA核外輸送とは対照的に、U snRNA核外輸送に関与するRNAヘリカーゼは未知である。これまでにUAP56を候補因子として同定していた。当該年度では、試験管内反応系を構築することにより、UAP56がATP依存的にPHAXのRNA結合を促進することがわかった。また、PHAXとUAP56を含む新規タンパク質複合体を同定した。