オルガネラ間コンタクトを担う低親和性タンパク質複合体の溶液NMR解析

对负责细胞间接触的低亲和力蛋白质复合物进行溶液核磁共振分析

• 批准号: 21K06047
• 负责人: 古板 恭子
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K06047/
• 关键词: 溶液NMR; 膜コンタクトサイト; VAMP-associated protein; LLPS; タンパク質複合体; 分子間相互作用; VAP; FFAT-likeモチーフ

小胞体膜貫通タンパク質Vesicle-associated membrane protein Associated Protein (VAP)は小胞体と他のオルガネラあるいは細胞膜とのコンタクトサイトにおけるタンパク質間相互作用を担うタンパク質である。VAPのN末端側にあるMajor Sperm Protein (MSP)ドメイン(VAPMSP)は、FFAT-likeモチーフと呼ばれる非常に多様な配列を結合することが知られている。VAPMSPとFFAT-likeモチーフの相互作用は様々な細胞機能に重要であることが示されている。しかし、VAPMSPがどのように多様な配列を認識しているのかは不明である。本年度は13C標識VAPMSPと非標識のFFAT-likeモチーフを含むペプチドからなる試料を用い、溶液NMRを用いて13CフィルターNOESY測定を行った。この測定では、理論的には標識分子と非標識分子の間で互いに近接した水素原子がある場合にのみ信号が観測される。測定の結果いくつか信号が確認でき、VAPMSPとペプチドは結合していると考えられた。また、化学シフトの帰属ができれば原子レベルでの分子間相互作用の情報が得られると考えられた。次にVAPがFFAT-likeモチーフが相互作用する際に液液相分離（LLPS）する可能性があるため、VAPMSPがin vitroでLLPSするかどうかを検証した。その結果、いくつかの条件下でLLPSすることが確認できた。LLPS形成条件の検討により、特に酸性低温条件でLLPSしやすい傾向があることが分かった。

The Vesicle-associated membrane protein Associated Protein penetrates the cytoplasm タ パ パ Small cell body (VAP) は と he の オ ル ガ ネ ラ あ る い は membrane と の コ ン タ ク ト サ イ ト に お け る タ ン パ ク qualitative interaction between を bear う タ ン パ ク qualitative で あ る. VAP の N terminal side に あ る Major Sperm Protein (MSP) ド メ イ ン (VAPMSP) は, FFAT - like モ チ ー フ と shout ば れ る very に others more な match column を combining す る こ と が know ら れ て い る. VAPMSP と FFAT - like モ チ ー フ の interaction は others 々 な cell function に important で あ る こ と が shown さ れ て い る. <s:1> を <s:1>, VAPMSPが <s:1> ように ように multiple な combinations を understanding て て る る を を unclear である This year は 13 c logo VAPMSP と non logo の FFAT - like モ チ ー フ を containing む ペ プ チ ド か ら な る sample を with NMR を use い い, solution て 13 c フ ィ ル タ ー NOESY line measurement を っ た. こ の determination で は, theory of に は identify molecular と non identity between molecular の で mutual い に nearly meet し た water element atoms が あ る occasions に の み signal が 観 measuring さ れ る. The <s:1> results were measured. The く く and the が signal が confirmed the で で, and the VAPMSPとペプチド えられた combined with the <s:1> て and ると ると ると were examined. ま た, chemical シ フ ト の 帰 genus が で き れ ば atomic レ ベ ル で の intermolecular interactions の intelligence が ら れ る と exam え ら れ た. Time に が VAP FFAT - like モ チ ー フ が interaction す る interstate に liquid liquid phase separation (LLPS) す る possibility が あ る た め, VAPMSP が in vitro で LLPS す る か ど う か を 検 card し た. Youdaoplaceholder0 そ results, で く く く する する とが とが とが する confirm で た た under <s:1> conditions. The formation conditions of LLPS are: 検, によ によ, に, extremely acidic, low-temperature conditions, で, LLPS やす, やす, がある, がある, とが, によ, った.

项目成果

溶液NMRによる膜コンタクトサイトの形成と機能に関与するVAP-A:FFAT-likeモチーフ相互作用の研究

通过溶液 NMR 研究参与膜接触位点形成和功能的 VAP-A:FFAT 样基序相互作用

• 发表时间: 2021
• 作者: 古板恭子;平岡万里菜;花田賢太郎;藤原敏道;児嶋長次郎
• 通讯作者: 児嶋長次郎

NMR structural analysis of human VAMP-associated protein B

人VAMP相关蛋白B的NMR结构分析

• 发表时间: 2021
• 作者: Togawa;W.;Furuita;K.;Kobayashi;N.;Fujiwara;T.;Kojima;C
• 通讯作者: C