エンドサイトーシス経路を基軸とした細胞内輸送経路の解明

点击翻译按钮获取中文摘要

本年度は以下の研究を実施した。（1）クラスリン小胞の初期エンドソームへの融合機構の解明、についてはラパマイシン誘導ヘテロ二量化を用いたPan1pの異所性発現の影響について実験を進めた。本年度の研究ではアクチン活性化因子や脱重合因子もPan1繋留部位に順番にリクルートされ、ここでエンドサイトーシス過程の後期過程が再現されることを明らかにした。さらに、クラスリン小胞のエンドソームへの輸送に必要なアクチンケーブルもPan1繋留部位に繋留されることを明らかにした。(2) ゴルジ体由来小胞とエンドソームの融合機構、についてはゴルジ体からの輸送経路を遮断した際のクラスリン小胞-エンドソーム間の融合に与える影響について、クラスリンアダプタータンパク質であるGGA2の機能ドメインを部分的に欠損する変異体を作成し、エンドサイトーシス経路の輸送への影響を調べた。その結果、他のクラスリンアダプタータンパク質との結合を仲介するGAEドメイン欠損体では、野生型や他のドメイン欠損体と比べて顕著なエンドサイトーシスの異常が見られた。また、リサイクル経路のマーカーであるSnc1p(R-SNARE)の局在を詳細に調べたところ、蛍光α-factorと同様にトランスゴルジ網内のTlg2pが局在する区画と共局在することが分かった。さらに、GGAs欠損体ではSnc1pはTlg2pと共にSec7pとは異なる部位に蓄積することが分かった。(３)エンドソームにおける積荷の分解とリサイクリングの選別機構、については脂質膜成分であるフォスファチジルセリン（PS）合成酵素の欠損体（cho1Δ）の解析を行った。その結果、cho1ΔではPSが著しく低下し蛍光α-factorの取り込み低下が見られた。これはα-factorの受容体であるSte2pの細胞膜局在の低下が原因であることを明らかにした。