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細胞接着制御因子Rap1による新たな好中球細胞死制御メカニズムの解明

阐明细胞粘附调节因子 Rap1 控制中性粒细胞死亡的新机制

基本信息

批准号：
21K06181
负责人：
上岡裕治
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Kansai Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

細胞接着シグナルとNETosisとの関連性を示唆する報告はあるものの、NETosisの詳細な分子メカニズムは未だ不明である。また、定量的なNETosisの評価が難しい現状がある。本研究課題では、当該年度において細胞接着を制御するRap1シグナル分子の好中球特異的ノックアウトマウスの作出を完了し、予定していたノックアウトマウスのバリエーションを揃えることができた。しかし、コロナ禍でのケージ数削減などもあり同時での複数種の比較実験ができていない。いったん数を減らさざるをえなかかったノックアウトマウスの数を再びそろえて比較実験を行う予定である。各種ノックアウトマウスの骨髄由来の好中球を精製してin vitro解析を進めたが、好中球特異的Talin1ノックアウトマウスの骨髄由来細胞ではTalin1のノックアウトが不十分であったため、細胞調整の段階で再検討を要した。骨髄内の未分化好中球ではCreによる遺伝子発現阻害が不十分だと考え、末梢（腹腔）からの好中球回収を進めた。LPS、Zymosan、caseinの腹腔内投与で惹起される好中球浸潤を野生型と好中球特異的Mst1ノックアウトマウスを用いて腹腔内および血中で比較した。新しい回収法によりin vitroの実験に使える細胞数を確保することは可能であるが、必要なマウス数を減らすためには今後は刺激後の経時的なデータを集める必要がある。NETosisの定量的画像評価に関しては再現性や解析方法に課題はあるものの、類似の報告が近年多く報告されており、静止画での解析は学術的新規性が薄れていると判断した。そのため、血管内の血流を模倣した条件下での解析を進めている。最終年度で動画データを用いた機械学習を導入し、MATLABソフトウエアでNETosis形態評価プログラムを進める予定である。

The relationship between cell adhesion and NETosis is not clear in this report. The quantitative evaluation of NETosis is difficult. This research topic is to complete the preparation of the molecular and globular specific protein in the year when the cells are subsequently controlled. The number of disasters is reduced simultaneously and the number of comparisons is increased. The number of entries in the list is reduced by the number of entries in the list. All kinds of Talin1, Talin 2, Talin 3, Talin 4, Talin 5, Talin 6, Talin 7, Talin 8, Talin 9, Talin 9, Talin 9 In the bone, there is no differentiation of the good ball, and there is no differentiation of the good ball. LPS, Zymosan and Casein are injected into the abdominal cavity and are used in the abdominal cavity. The number of cells in the vitro can be reduced if necessary, and the number of cells in the vitro can be reduced if necessary The quantitative evaluation of NETOSIS is related to reproducibility and analytical methods. In recent years, there have been many reports on static painting and analytical methods. Under the condition of blood flow simulation in blood vessels, the analysis of blood flow in blood vessels is carried out. The final year of animation is the introduction of machine learning, MATLAB software, NETosis morphology evaluation, and the introduction of pre-determined software.