新規ヒストン修飾解析手法を用いた白色脂肪細胞分化過程のエピゲノム変化の解析

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本研究では白色脂肪細胞の脂肪分化過程におけるヒストン修飾を網羅的に解析し、ヒストン修飾のなかでも同一ヒストン内のヒストンビバレント修飾の存在と意義を明らかにすることを目的としている。ヒストン修飾の分析において、既報の質量分析法（セミボトムアップ法）ではヒストンモノメチル化と同一質量の修飾を判別できないことから、本研究ではセミボトムアップ法で行われる質量分析の前処置である無水プロピオニル酸処理を同位体試薬13C無水プロピオン酸処理へ変更し、従来法では同定できないヒストンモノメチル化の同定を行っている。同位体試薬13C無水プロピオン酸処理を行う系を立ち上げは終了し、白色脂肪分化過程の質量分析に必要な量の白色脂肪細胞を分化させ、時系列ごと（白色脂肪分化前、1日後、2日後、4日後、8日後）のヒストン精製を行い、無水プロピオン酸処理による質量分析と、13Cプロピオン酸処理による質量分析を行った。これによりこれまで既報では同定が困難であったヒストンのモノメチル化の同定、およびヒストン修飾の経時的変化のデータの収集を行った。無水プロピオン酸処理と、13C無水プロピオン酸処理で同定される修飾の違いについて比較検討を行い、既報と13C無水プロピオン酸処理による質量分析により同定されるヒストン修飾が異なることを確認することができた。また、一定の修飾においては、既報と13C無水プロピオン酸処理によるヒストン修飾の定量的変化が同一であることを確認することができた。