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時間軸上で変化する代謝と糖鎖の関係解明に向けた高スループット糖鎖解析システム開発

开发高通量聚糖分析系统，以阐明代谢与随时间变化的聚糖之间的关系

基本信息

批准号：
21K06505
负责人：
木下充弘
金额：
$ 1.58万
依托单位：
Kindai University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

2022年度は研究期間初年度に全自動マイクロチップ電気泳動装置を利用して開発した糖鎖解析システムについて、実利用性の検証として分離場として使用する電極埋め込み型石英製マイクロチップ、APTS標識糖鎖の分離に用いるゲルバッファーについての劣化試験を10か月に渡り実施した。石英製マイクロチップについては、特別な洗浄剤や洗浄工程なく水のみの洗浄でも分離能、電気泳動時間の再現性が保たれていた。また、分離に用いるゲルバッファーについても冷蔵保存のみでも、分析再現性は保持されており、本研究の目的である代謝と糖鎖の関係を明らかにするために必要となる大量試料かつ長期間での実利用レベルにあることを実証できた。これらの性能評価試験に加え、ヒト血清糖タンパク質糖鎖、培養細胞から得られた膜タンパク質由来糖鎖、エクソソーム由来糖鎖の分析への応用試験も実施し、汎用されるキャピラリー電気泳動法と同等レベルの分離能、10倍以上のスループットを達成できることを明らかにした。2023年度第三四半期からは、各種培養細胞をAMPK活性化/阻害剤、EGF/FGFなど増殖因子など、細胞内代謝を変化させる薬剤存在下培養し、膜タンパク質から調製した糖鎖の分析へと応用し、本研究の最終目的である代謝と糖鎖の関係解明に向け、多検体試料について解析とデータの蓄積を本格化させた。

In 2022, at the beginning of the study period, the use of fully automatic electrokinetic devices for sugar lock analysis, practical evaluation, separation field and use of electrode buried quartz, APTS identification, sugar lock separation and degradation test were carried out for 10 months. Quartz system, special washing, washing engineering, water washing, separation energy, electric swimming time reproducibility The purpose of this study is to clarify the relationship between metabolism and carbohydrate retention, and to demonstrate the long-term utilization of a large number of samples. The performance evaluation test was carried out by adding and removing serum glycogen, culturing cells, obtaining membrane glycogen, and analyzing glycogen. The test was carried out by using electrokinetic method, and the separation energy was equal to or higher than 10 times. In the third and fourth half of fiscal 2023, the analysis of AMPK in cultured cells in the presence of AMPK activating/inhibiting agents, EGF/FGF promoting factors, and intracellular metabolic agents was carried out. The ultimate goal of this study was to clarify the relationship between AMPK and metabolic glycoproteins, and to characterize the accumulation of AMPK in multiple samples.

项目成果

期刊论文数量（12）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Study of HPLC separation and fractionation of 8-aminopyrene-1,3,6-trisulfonic acid labeled N-glycans using a hydrophilic interaction chtomatography column

使用亲水相互作用色谱柱对 8-氨基芘-1,3,6-三磺酸标记的 N-聚糖进行 HPLC 分离和分级的研究

DOI：
发表时间：
2022
期刊：
BUNSEKIKAGAKU
影响因子：
0
作者：
Yamamoto S;Miyawaki N;Kawakami N;Kinoshita M;Suzuki S
通讯作者：
Suzuki S

グライコミクスをエイジング研究に活かす

将糖组学应用于衰老研究

DOI：
发表时间：
2021
期刊：
影响因子：
0
作者：
Aso Saki;Ogawa Shoujiro;Nishimoto‐Kusunose Shoichi;Satoh Mamoru;Ishige Takayuki;Nomura Fumio;Higashi Tatsuya;木下充弘
通讯作者：
木下充弘

光硬化性レクチン固定化アクリルアミドゲルを用いる糖鎖のアフィニティーマイクロチップ電気泳動法の開発

使用光固化凝集素固定丙烯酰胺凝胶开发碳水化合物链亲和微芯片电泳方法