時間軸上で変化する代謝と糖鎖の関係解明に向けた高スループット糖鎖解析システム開発

开发高通量聚糖分析系统，以阐明代谢与随时间变化的聚糖之间的关系

• 批准号: 21K06505
• 负责人: 木下 充弘
• 金额: $ 1.58万
• 依托单位: Kindai University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K06505/
• 关键词: マイクロチップ電気泳動; 糖鎖; 代謝; 糖タンパク質糖鎖; 高スループット; レクチン

2022年度は研究期間初年度に全自動マイクロチップ電気泳動装置を利用して開発した糖鎖解析システムについて、実利用性の検証として分離場として使用する電極埋め込み型石英製マイクロチップ、APTS標識糖鎖の分離に用いるゲルバッファーについての劣化試験を10か月に渡り実施した。石英製マイクロチップについては、特別な洗浄剤や洗浄工程なく水のみの洗浄でも分離能、電気泳動時間の再現性が保たれていた。また、分離に用いるゲルバッファーについても冷蔵保存のみでも、分析再現性は保持されており、本研究の目的である代謝と糖鎖の関係を明らかにするために必要となる大量試料かつ長期間での実利用レベルにあることを実証できた。これらの性能評価試験に加え、ヒト血清糖タンパク質糖鎖、培養細胞から得られた膜タンパク質由来糖鎖、エクソソーム由来糖鎖の分析への応用試験も実施し、汎用されるキャピラリー電気泳動法と同等レベルの分離能、10倍以上のスループットを達成できることを明らかにした。2023年度第三四半期からは、各種培養細胞をAMPK活性化/阻害剤、EGF/FGFなど増殖因子など、細胞内代謝を変化させる薬剤存在下培養し、膜タンパク質から調製した糖鎖の分析へと応用し、本研究の最終目的である代謝と糖鎖の関係解明に向け、多検体試料について解析とデータの蓄積を本格化させた。

2022 は study period at the beginning of the annual に automatic マ イ ク ロ チ ッ プ 気 swimming devices を using し て open 発 し た sugar lock resolution シ ス テ ム に つ い て, be use の 検 card と し て separation field と し て use す る electrode buried め 込 み type stone imperial マ イ ク ロ チ ッ プ, APTS identification lock の separation に sugar with い る ゲ ル バ ッ フ ァ ー に つ い て の degradation Experiment: を10 を moon に Watanabe た Minshi た. Stone imperial マ イ ク ロ チ ッ プ に つ い て は incorporated, special な tonic や engineering at な く water の み の で at も separation, electricity 気 swimming time の reproducibility が bartender た れ て い た. ま た, separation に い る ゲ ル バ ッ フ ァ ー に つ い て も cold 蔵 save の み で も, analyze the reproducibility は keep さ れ て お り purpose, this study の で あ る と sugar metabolism lock の masato を and Ming ら か に す る た め に necessary と な る large sample か つ between long-term で の be using レ ベ ル に あ る こ と を card be で き た. こ れ ら の performance evaluation 価 test に え, ヒ ト serum sugar タ ン パ ク qualitative lock sugar, culture cell か ら have ら れ た membrane タ ン パ ク origin sugar lock, エ ク ソ ソ ー ム origin sugar lock の analysis へ の 応 with test も be し, domestic さ れ る キ ャ ピ ラ リ ー 気 swimming method と equal レ ベ ル の separation can, more than 10 times の ス ル ー プ ッ ト を reached で き る こ と を Ming ら に に た. 2023 third four half か ら は, all kinds of culture cell を AMPK activation/resistance against tonic, EGF, FGF な ど raised colonization factor な を ど, cell metabolism - the さ せ る 薬 tonic in the presence of cultivating し, membrane タ ン パ ク qualitative か ら modulation し た sugar lock の analysis へ と 応 し, this research aim の で あ る と sugar metabolism lock の masato is interpret に け, 検 more Volume test material に, に て て analysis とデ, タ <s:1> accumulation を localization させた.

项目成果

Study of HPLC separation and fractionation of 8-aminopyrene-1,3,6-trisulfonic acid labeled N-glycans using a hydrophilic interaction chtomatography column

使用亲水相互作用色谱柱对 8-氨基芘-1,3,6-三磺酸标记的 N-聚糖进行 HPLC 分离和分级的研究

• 发表时间: 2022
• 期刊: BUNSEKIKAGAKU
• 作者: Yamamoto S;Miyawaki N;Kawakami N;Kinoshita M;Suzuki S
• 通讯作者: Suzuki S

グライコミクスをエイジング研究に活かす

将糖组学应用于衰老研究

• 发表时间: 2021
• 作者: Aso Saki;Ogawa Shoujiro;Nishimoto‐Kusunose Shoichi;Satoh Mamoru;Ishige Takayuki;Nomura Fumio;Higashi Tatsuya;木下充弘
• 通讯作者: 木下充弘

光硬化性レクチン固定化アクリルアミドゲルを用いる糖鎖のアフィニティーマイクロチップ電気泳動法の開発

使用光固化凝集素固定丙烯酰胺凝胶开发碳水化合物链亲和微芯片电泳方法

• 发表时间: 2022
• 作者: 井澤満;河嶋秀和;奥野結衣;中谷純菜;石原慶一;秋葉聡;高田和幸;楯 直子・平嶋 尚英;山本佐知雄，鮎川立希，高橋佑季，木下充弘
• 通讯作者: 山本佐知雄，鮎川立希，高橋佑季，木下充弘

光重合性Phos-tag含有アクリルアミドゲルを用いるリン酸化化合物のオンライン濃縮・標識・分離システムの開発

使用含 Phos 标签的光聚合丙烯酰胺凝胶开发磷酸化化合物的在线浓缩、标记和分离系统

• 发表时间: 2022
• 作者: 井澤満;河嶋秀和;奥野結衣;中谷純菜;石原慶一;秋葉聡;高田和幸;山本佐知雄，矢野祥子，木下充弘
• 通讯作者: 山本佐知雄，矢野祥子，木下充弘

多分岐マイクロチップとレクチン固定化アクリルアミドゲルを用いる糖鎖のアフィニティーマイクロチップ電気泳動法の開発

使用多分支微芯片和凝集素固定丙烯酰胺凝胶开发聚糖亲和微芯片电泳方法

• 发表时间: 2022
• 作者: 村山周平;立堀華奈子;竹村今日子;加藤大;山本佐知雄，鮎川立希，鈴木茂生，木下充弘
• 通讯作者: 山本佐知雄，鮎川立希，鈴木茂生，木下充弘