好酸球に内在の脂肪酸代謝によるタンパク質修飾の網羅的解析

嗜酸性粒细胞内源性脂肪酸代谢对蛋白质修饰的综合分析

• 批准号: 21K06557
• 负责人: 磯部 洋輔
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Institute of Physical and Chemical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2026-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K06557/
• 关键词: 好酸球; リポキシデーション; 12/15-LOX; ケミカルプロテオミクス; ケミカルバイオロジー; 標的同定

本研究では、好酸球に高発現する多価不飽和脂肪酸（PUFA）代謝酵素12/15-LOXの機能解明を目指している。とくに、本酵素により生成する反応性脂質代謝物（lipid-derived electrophile: LDE）が修飾する細胞内タンパク質に着目し、最先端のケミカルプロテオミクス解析技術によってLDEの標的を明らかにするとともに、その機能の解明を目標としている。本年度は、これまでに脂肪酸由来のケミカルプローブ等によって検出した好酸球の脂質修飾タンパク質について、LC-MS/MSを用いたプロテオミクス解析による同定を行った。腹腔細胞から10^7オーダーの好酸球が回収できるIL-5トランスジェニック（Tg）マウスから単離した好酸球に対し、12/15-LOXの阻害剤の処理・未処理の条件下で脂肪酸アルキンプローブを処理し、細胞内タンパク質を修飾させた。その後、クリック反応によって修飾タンパク質にビオチンを付加し、ストレプトアビジンビーズへの吸着、on beadsでのトリプシン消化の後プロテオミクス解析を行った。その結果、全部で813種類のタンパク質が同定された中、12/15-LOXの阻害剤によって有意にシグナルが減弱したタンパク質が144種類認められ、これらが好酸球における12/15-LOX由来LDEによる修飾タンパク質と考えられた。LDEは主にタンパク質のシステイン残基を修飾することが知られている。そこで、システイン反応性のケミカルプローブを用いた濃縮とプロテオミクスと組み合わせることで、好酸球におけるシステイン修飾状態の変動をプロテオームワイドに捉えることも試みた。その結果、脂肪酸アルキンプローブにより見出されたLDEの標的タンパク質における、修飾部位のシステイン残基の候補を得ることに成功した。

In this study, high levels of polyphenols and fatty acid (PUFA) substituted enzymes 12/15-LOX could be used to understand the target protein. This enzyme is responsible for the production of anti-lipid substitutes (lipid-derived electrophile: LDE). The intracellular lipid metabolism is focused on the target cells, and the first part of the system is used to analyze the technical information of the LDE system. The mechanism can be used to understand the target information. The origin of fatty acids in this year's diet, the origin of fatty acids, and so on. The abdominal cavity contains 10 ^ 7 cells, IL-5 cells, acid balls, sour balls, IL-5 balls, sour balls, fatty acids, sour balls, fatty acids, and intracellular acids. After that, you can tell me that you have to pay for it. After that, you will have to pay for it. You will have to pay for it. After that, you will be able to absorb it and on beads it to digest it. After that, you will have to analyze the line. The result of the test, all the results of the test are the same as those of the 12/15-LOX system, and the 12/15-LOX system is intended to improve the performance of the system. The results show that there are 144 types of authentication in the system, and there is a good acid ball test in 12