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経口投与可能な神経細胞特異的カリウム排出促進薬による神経変性予防効果の実証

口服神经元特异性钾排泄促进剂的神经变性预防效果的证明

基本信息

批准号：
21K06723
负责人：
倉本展行
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Setsunan University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

マウス胎児大脳皮質由来初代培養神経細胞におけるKCC2発現をPCRで確認した。この細胞に対してKCC2開口薬または阻害薬を曝露したが、非曝露群と比較してMTT還元能は変化しなかった。一方、予期せず、阻害剤VU 0240551を前処置しておくと初代培養神経細胞にNMDA曝露によるミトコンドリア脱分極の程度が減弱し、NMDA曝露に伴う細胞死が、ある程度抑制された。またVU 0240551単独でもミトコンドリアが緩徐に脱分極したが、これはミトコンドリアKチャネル阻害剤で抑えられた。従って現段階では、KCC2阻害剤には神経保護作用があり、それはミトコンドリアがK+緩衝することで実現している可能性が示唆された。前年度までにすすめてきた簡易カリウムイオンセンサーを用いて、培養液や培養細胞の破砕液及び組織破砕液のK+濃度を簡易に測定し、比較検討する方法を当年度でほぼ確立した。この方法では、個々の細胞内のイオン濃度の定量は不可能で有ったが、薬物曝露有無などによるK+濃度の相対的な相違を定義することができることがわかった。この方法を用いて、K+濃度の異なる培地でインキュベートすると、濃度依存的に細胞内K+濃度が変化することが確認できた。一方で、K+チャネル開口薬による検討では細胞内K+濃度の減少が認められず、方法の調整を行っている。長期飼育（6月以上）マウスの脳内のSUR1及びKir6.2発現量の程度をイムノブロット法で比較すると、低分子SUR1が高齢マウスで増加する傾向が認められた。免疫染色法でも海馬領域で高齢マウス側にSUR1の高いシグナルが認められた。これについては現在は繰り返し実験により真偽を確認中である。

Youdaoplaceholder1 ウス fetal 児 large 脳 cortex originated from primary cultured neurocytes におけるKCC2, をPCRで confirmed the た. この cells にし seaborne て KCC2 openings 薬または resistance against 薬を exposure したが, non exposed group と compare して determined by MTT can also yuan は variations change しなかった. Side, to the period せず, resistance against tonic VU before 0240551 を処しておくと early training resting to restore energy 経 cell に NMDA exposure によるミトコンドリア points very weakened の degree がし, NMDA exposure にがう cell death, ある extent inhibit された. また VU 0240551 単 alone でもミトコンドリアが slow xu に points off very したが, これはミトコンドリア K チャネル resistance against tonic でえ suppression られた. 従って now Duan Jie では, KCC2 resistance against tonic には経 god protect があり, それはミトコンドリアが K + buffer することで be presently していがる possibility in stopping された. Before the annual までにすすめてきた simple カリウムイオンセンサーを with いてや, broth culture cell の砕 liquid and び breaking 砕 liquid の K + concentration determination simple をにし, comparative beg す検をる method into でほぼ establish した. この way では, a 々の intracellular のイオの quantitative はン concentration could not have a っでたが, 薬 exposure without などによるの phase K + concentration of seaborne な conceives を definition することができることがわかった. この way を with いて, concentration of K + の different なる petty でインキュベートすると, concentration of K + concentration dependent に cell が variations change することが confirm できた. Party で, K + チャネル openings 薬による beg で検は intracellular K + concentration のが recognize められず, method の line adjustment をっている. Long-term breeding (6 month or more) マウスの脳 within の SUR1 and び Kir6.2 発 amount is の degree をイムノブロットで comparison すると, low molecular SUR1 が high 齢マウスで raised plus する tendency が recognize められた. Immunostaining method: でで hippocampal domain: で high 齢ウスウス side にSUR1 <s:1> high シグナシグナがが recognition められた. The authenticity of を is being confirmed at である. Youdaoplaceholder0. Youdaoplaceholder0 て. Youdaoplaceholder7.