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経口投与可能な神経細胞特異的カリウム排出促進薬による神経変性予防効果の実証

口服神经元特异性钾排泄促进剂的神经变性预防效果的证明

基本信息

批准号：
21K06723
负责人：
倉本展行
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Setsunan University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

マウス胎児大脳皮質由来初代培養神経細胞におけるKCC2発現をPCRで確認した。この細胞に対してKCC2開口薬または阻害薬を曝露したが、非曝露群と比較してMTT還元能は変化しなかった。一方、予期せず、阻害剤VU 0240551を前処置しておくと初代培養神経細胞にNMDA曝露によるミトコンドリア脱分極の程度が減弱し、NMDA曝露に伴う細胞死が、ある程度抑制された。またVU 0240551単独でもミトコンドリアが緩徐に脱分極したが、これはミトコンドリアKチャネル阻害剤で抑えられた。従って現段階では、KCC2阻害剤には神経保護作用があり、それはミトコンドリアがK+緩衝することで実現している可能性が示唆された。前年度までにすすめてきた簡易カリウムイオンセンサーを用いて、培養液や培養細胞の破砕液及び組織破砕液のK+濃度を簡易に測定し、比較検討する方法を当年度でほぼ確立した。この方法では、個々の細胞内のイオン濃度の定量は不可能で有ったが、薬物曝露有無などによるK+濃度の相対的な相違を定義することができることがわかった。この方法を用いて、K+濃度の異なる培地でインキュベートすると、濃度依存的に細胞内K+濃度が変化することが確認できた。一方で、K+チャネル開口薬による検討では細胞内K+濃度の減少が認められず、方法の調整を行っている。長期飼育（6月以上）マウスの脳内のSUR1及びKir6.2発現量の程度をイムノブロット法で比較すると、低分子SUR1が高齢マウスで増加する傾向が認められた。免疫染色法でも海馬領域で高齢マウス側にSUR1の高いシグナルが認められた。これについては現在は繰り返し実験により真偽を確認中である。

PCR was used to confirm the expression of KCC2 in primary cultured neurons. The cells were exposed to KCC2 and the cells were not exposed to MTT. In addition, the degree of depolarization of NMDA exposure in primary cultured neurons was reduced and the degree of cell death was inhibited by NMDA exposure before treatment with VU0240551. VU0240551 Single unit for the first time in a row. The possibility of KCC2 blocking effect on K+ buffer is shown. A simple method for measuring K+ concentration in culture medium, cell culture medium and tissue culture medium was established in the past year. This method makes it impossible to quantify the concentration of K + in each cell, and to define the relationship between the concentration of K+ and the exposure of K +. This method is used to determine the concentration of K+ in cells. A method for the determination of K+ concentrations in cells is proposed. Long-term breeding (more than 6 months), the degree of occurrence of SUR1 and Kir6.2 in the female is compared with that in the male, and the tendency of increase of SUR1 and Kir6.2 in the female is recognized. Immunostaining method was used to detect the high level of hippocampus. This is the first time I've ever seen a woman who's not a real woman.