NMDAレセプターコンプレックス上の新しい調節部位の探索研究

NMDA 受体复合物新调控位点的探索性研究

• 批准号: 14771276
• 负责人: 倉本 展行
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Kanazawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14771276/
• 关键词: NMDA; Receptor; Ca^<2+>; Fe^<2+>; Fe^<3+>; Mg^<2+>; Neuron; culture

大脳皮質神経細胞を妊娠18日目のラット胎児脳から単離し、無血清培養液中で培養した。この培養細胞をCa^<2+>感受性蛍光指示薬であるfluo-3で前処理後、複数細胞の蛍光強度変化を共焦点レーザー顕微鏡で同時に観察した。その結果、培養細胞をNMDAに暴露したところ、MgCl_2非添加条件下で、多数の神経細胞において蛍光強度上昇が観察された。一方、NMDA受容体特異的アンタゴニストであるMK-801を前処置すると、NMDAによる蛍光強度増加は完全に抑制された。NMDA暴露継続中は、少なくとも30分以上は蛍光強度上昇が観察されたのに対して、高濃度KCl添加による蛍光強度上昇は、暴露継続中でも経時的に減弱された。FeCl_2の添加は、NMDA適用に伴う蛍光強度上昇を著明に抑制したが、高濃度KCl添加による蛍光強度上昇に対してはほとんど著明な影響を与えなかった。この遊離Fe^<2+>の抑制効果は、10〜200μMの濃度範囲内では添加するFeCl_2の濃度依存的に出現したが、FeCl_3の添加は200μMでもNMDAによる蛍光強度上昇に著変を与えなかった。以上の結果からNMDA受容体の活性化が細胞内遊離Ca^<2+>濃度の増加を引き起こすこと、および膜電位依存型Ca^<2+>チャネルでは速やかに脱感作が招来されるのに対して、NMDA受容体Ca^<2+>チャネルでは脱感作が誘発されにくいことが確認されたばかりでなく、NMDAによるCa^<2+>濃度上昇は遊離Fe^<2+>により選択的かつ可逆的に阻害されることが推察された。

在怀孕的第18天，从胎儿大鼠脑分离出脑皮质神经元，并在无血清培养基中培养。用Fluo-3，Ca^<2+> - 敏感的荧光指示剂预处理培养的细胞，并在共聚焦激光显微镜下同时观察到多个细胞的荧光强度变化。结果，当培养的细胞暴露于NMDA时，在没有MGCL_2添加的条件下，在许多神经元中观察到荧光强度的增加。另一方面，使用NMDA受体特异性拮抗剂MK-801进行预处理，完全抑制了由NMDA引起的荧光强度的增加。尽管在NMDA暴露期间观察到至少30分钟的荧光强度增加，但即使在暴露期间，由于添加高浓度KCL引起的荧光强度的增加也会减弱。 FECL_2的添加显着抑制了与NMDA应用相关的荧光强度的增加，但由于添加了高浓度KCL，对荧光强度的增加几乎没有显着影响。游离Fe^<2+>的这种抑制作用以浓度依赖性的FECL_2的浓度范围内出现，但即使在200μm处，FECL_3的添加也不会显着改变NMDA引起的荧光强度的增加。从上述结果中可以证实，NMDA受体的激活会导致细胞内游离Ca^<2+>浓度的增加，并且脱敏是在膜电压依赖性Ca^<2+>通道中迅速引起的，而NMDA受体CA^<2 e <2+> <2 e> <2> nmda受体的浓度却很少引起。自由fe^<2+>有选择地和可逆地抑制。

项目成果

Noritaka Nakamichi et al.: "Dual mechanisms of Ca^<2+> increases elicited by N-methyl-D-aspartate in immature and mature cultured cortical neurons"Journal of Neuroscience Research. 67. 275-283 (2002)

Noritaka Nakamichi等人：“N-甲基-D-天冬氨酸在未成熟和成熟的培养皮层神经元中引起Ca 2+ 增加的双重机制”神经科学研究杂志。

Noritaka Nakamichi et al.: "Blockade by ferrous iron of Ca2+ influx through N-methyl-D-aspartate receptor channels immature cultured rat cortical neurons"Journal of Neuro chemistry. 83. 1-11 (2002)

Noritaka Nakamichi 等人：“二价铁阻断 Ca2+ 通过 N-甲基-D-天冬氨酸受体通道流入未成熟培养的大鼠皮质神经元”神经化学杂志。

Nobuyuki Kuramoto et al.: "Existence of xenobiotic response element binding in Dictyostelium"Biochimica Et Biophysica Acta. 1578. 1-11 (2002)

Nobuyuki Kuramoto 等人：“盘基网柄菌中结合的外源反应元件的存在”Biochimica Et Biophysicala Acta。

Nobuyuki Kuramoto et al.: "Xenobiotic response element binding enriched in both nuclear and microsomal fractions of rat cerebellum"Journal of Neuro chemistry. (in press). (2003)

Nobuyuki Kuramoto 等人：“大鼠小脑的核和微粒体部分中富含异生物质反应元件结合”神经化学杂志。

Nobuyuki Kuramoto et al.: "Modulation of DNA binding of nuclear transcription factors with leucine-zipper motifs by particular endogenous polyamines in murine central and peripheral tissues"Brain Research. (in press). (2003)

Nobuyuki Kuramoto 等人：“小鼠中枢和外周组织中特定内源性多胺对核转录因子与亮氨酸拉链基序的 DNA 结合的调节”脑研究。