Elucidation of molecular mechanism that endocrine secretory granule biogenesis

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内分泌顆粒形成におけるマスター遺伝子を明らかにする目的で、前年度に構築したマスター遺伝子候補（INSM1およびMYT1L）の発現ベクターを非神経内分泌系である肺大細胞癌株H1299に導入し、導入の是非をウエスタンブロット法により確認した。導入株においてINSM1の恒常的な発現が確認された一方、MYT1Lの発現は確認されなかった。この現象はH1299以外の細胞株においても同様に認められた。MYT1L発現ベクターは、培養細胞株に一過性に導入した際には機能したことから、MYT1Lの恒常的な発現が細胞株の生存等にとって好ましくない影響をもたらす可能性が考えられた。そこでまずは、INSM1を導入したH1299（H1299-INSM1）を用いて解析を進めた。H1299-INSM1における内分泌顆粒関連遺伝子の発現をqRT-PCR法により解析した結果、内分泌顆粒関連遺伝子はINSM1によっては直接的に誘導されなかった。INSM1は神経内分泌特異的な分化誘導因子である一方、内分泌顆粒の形成には深く関与しない可能性が示された点は有意義である。上記の実験に並行して、顆粒内容物の融通性についての解析を進めた。前年度に作製したカルシトニン（CALCAv1遺伝子）発現ベクターに加えて、抗利尿ホルモン（AVP遺伝子）発現ベクターを構築し、H1299細胞に導入した。それら導入株について超微形態学的解析を行ったところ、REST抑制に加えてPROX1を導入し、さらにCALCAv1ないしはAVP遺伝子を導入したH1299において、内分泌顆粒と考えられる構造物が確認された。現在この結果を裏付けるデータを収集中であるが、この結果は、培養細胞株に人為的に内分泌顆粒を形成する過程において、内分泌顆粒に含有されるタンパクとしては、そのホルモンの種類は問わない可能性が示された。