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Forward genetic identification of new players in vitamin D signaling.

维生素 D 信号传导新参与者的正向遗传鉴定。

基本信息

批准号：
21K06950
负责人：
杉本幸太郎
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Fukushima Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K06950/
关键词：
核内受容体ビタミンD がん CRISPRライブラリ順遺伝学ゲノム編集

项目摘要

ビタミンDシグナルは骨代謝のみならず腫瘍発生など様々な生命現象に関与している。同シグナルの作用は主にビタミンD受容体(VDR)など核内受容体(NR)に属する転写因子を介した下流標的遺伝子の転写制御である。NRは特異リガンドのみならず様々な内因性蛋白質によって活性が調節されているが、これまでの創薬研究はリガンドの同定や新規合成に偏っており、内因性蛋白質を対象とするものは少ない。最近我々は最近細胞接着を基点とする一連のシグナルカスケードが、NRのセリン・リン酸化を介してリガンド感受性を著しく亢進させることを報告した。これはキナーゼを標的としてビタミンDシグナルを制御するという新たな治療戦略の可能性を示唆する。そこで本研究では順遺伝学的アプローチによりビタミンDシグナル関連蛋白質を網羅的に同定しようと試みた。まずビタミンDシグナルの蛍光レポーターを恒常発現する細胞株を樹立し、次に全遺伝子に対すプール化されたCRISPR-gRNA発現ベクターを導入する。これらの細胞にビタミンDを低濃度と高濃度で処理し、セルソーターで蛍光強度を測定する。低用量のビタミンDでレポーター活性の高いものを抽出すれば、これにはビタミンDシグナルを負に制御する遺伝子群を機能欠失した細胞群が含まれているはずで、逆もまた真である。この細胞群からゲノミックDNAを回収し取り込まれたsgRNA配列を次世代シークエンシングによって解析することで、ビタミンDシグナルを正負に制御する遺伝子群を網羅的に同定する。以上の研究計画のうち、本研究期間では上記のうちレポーター系の構築、選定、ならびに最適化を実施した。またgRNAライブラリの準備とトランスフェクションの最適化、および細胞のソーティングまで完了している。

I don't know. I don't know. I don't know what to do. In the same way as the primary receptor (VDR), the receptor in the nucleus (NR) belongs to the writing factor, the writing factor, the writing system, the host, the receiver, the receiver, the receptor, the recipient, the NR specific protein, protein, activity, activity and activity of endogenous proteins. Recently, I have been talking about the base point, the link, the phone, the NR, the acidification, the sensitivity, the sensitivity, the report. The possibility of a new treatment indicates that the possibility of a new treatment is instigated. In this study, you need to learn more about the identity of the protein network in this study. In the first place, the whole cell line is stable, and the whole cell line is stable, so that the whole cell line is stable, and the whole cell line is stable, so that the whole cell line is stable, and the whole cell line is isolated. This is the first time that the whole cell line has been isolated. The CRISPR-gRNA has been shown to show that the cell is isolated. Low temperature, high temperature, low temperature, low temperature, high temperature, low temperature, low temperature, high temperature, low temperature, low temperature, high temperature, low temperature, low temperature, high temperature, high temperature, low temperature, high temperature, low temperature, high temperature, high temperature, low temperature, high temperature, high temperature, low temperature, high temperature, low temperature, high temperature, high temperature, low temperature, high temperature, high temperature, low temperature, high temperature, high temperature, low temperature, high temperature, high temperature, low temperature, high temperature, high temperature, low temperature, low temperature, high temperature In the low dosage, there is a high level of activity in the extraction process. In the control system, the subgroup of the cell group is not available. The cell population contains the cell population. In order to control the identity of the sub-group network, the next-generation cell population has been selected from the DNA. The next-generation sgRNA is assigned to the next-generation network. During the period of this study, the students of the above research project were selected, selected and selected to make the most effective training program. This is the first time that you are going to have a problem. You are going to have a problem with gRNA.