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マラリア原虫におけるde novoヘテロクロマチン設立機構の解明

阐明疟疾寄生虫中异染色质的从头建立机制

基本信息

批准号：
21K06987
负责人：
森稔幸
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Tokyo Metropolitan University (2022)Osaka University (2021)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究テーマは、熱帯熱マラリア原虫Plasmodium falciparumの培養株を用いて、エピジェネティックな発現制御を受ける生殖分化因子AP2-Gの遺伝子座におけるヘテロクロマチン構築機構の解明を目標としている。2022年度は、人工染色体を基盤としたレポーターアッセイによって明らかとなったAP2-G遺伝子プロモーター領域(AP2-G 5')のヘテロクロマチン化誘導機能について、より詳細な分子機構にせまる解析を行った。CRISPR/Cas9を用いたゲノム編集によってAP2-G遺伝子座のヘテロクロマチン領域を全て除去した株（AP2-Gdel株）に、様々な長さのAP2-G 5'を蛍光マーカー遺伝子mNGの上流に連結したレポーターコンストラクトを導入した。これらの導入株それぞれについて、ヘテロクロマチンのマーカーであるH3K9me3（3重メチル化ヒストンH3）に対する抗体を用いたクロマチン免疫沈降（ChIP）アッセイを行い、AP2-G 5'のどの部分にヘテロクロマチン化誘導機能があるかを探索した結果、H3K9me3を誘導する最小領域（サイレンサー）配列を同定することに成功した。さらにこのサイレンサー配列について、コンディショナルに配列を削除するデリーションアッセイを行ったところ、サイレンサーの5'、3’領域にそれぞれH3K9me3の維持と確立の機能分担があることがわかった。本成果はマラリア原虫のH3K9me3を基盤としたヘテロクロマチン化が配列因子によって確立・維持されることを初めて示したものである。

In this study, Plasmodium falciparum protozoa strains were cultured in vitro. The reproductive differentiation factor (AP2-G) was detected in this study. In this study, the reproductive differentiation factor (PRF), parasite, protozoa, protozoa, protozoa, In the year 2022, artificial chromosomes were used in the field (AP2-G 5'). In the field of environmental protection (AP2-G 5'), the guidance mechanism was used to improve the performance of molecular machinery. CRISPR/Cas9 uses the device to edit the set, AP2-G the constellation, to remove all the strains (AP2-Gdel strain) in the field, and to remove all strains (AP2-Gdel strain) in the field. The long-term AP2-G 5 'photo photo shows that the mNG has the upper stream of the device. The mice were immunized with H3K9me3 (triple vaccine H3), the antibody was immunized with the vaccine (ChIP), and some of the mice were immunized with the AP2-G 5 'vaccine. The results, results and results of the experiment were compared. H3K9me3 guides the minimum domain (minimum domain) to assign the same definition to the success list. In order to make sure that the machine can share the performance of the equipment, it is necessary to make sure that the equipment is equipped with the equipment to make sure that the equipment is capable of maintaining the performance of the equipment. In this study, H3K9me3 protozoa, parasite, parasites, parasites, parasi