ウイルス感染を制御する宿主の新規抗ウイルス因子の同定

鉴定控制病毒感染的新型宿主抗病毒因子

• 批准号: 21K07048
• 负责人: 中津 祐一郎
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: National Institute of Infectious Diseases
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K07048/
• 关键词: 風疹ウイルス; 抗ウイルス応答

ウイルス感染を制御する宿主の抗ウイルス因子を同定することを目標とし、CRISPR-dCAS9遺伝子発現活性化型ライブラリーと風疹ウイルスを用いたスクリーニングを計画している。令和4年度は、上述の遺伝子発現活性化型ライブラリーの導入に先立って、昨年度までに構築した組換え風疹ウイルスによる細胞死を指標としたスクリーニング系の条件検討、およびその性能評価を実施した。本スクリーニング法は、宿主インターフェロン（IFN）経路をCRISPR-Cas9法によるゲノム編集により欠損させ、風疹ウイルスが高効率に増殖できるように改変した培養細胞を用い、本来は細胞障害性をほとんど有しない風疹ウイルスに自殺遺伝子である単純ヘルペスウイルスのチミジンキナーゼ（HSV-TK）を導入した組換え風疹ウイルスを感染させた際に、新たに風疹ウイルス抵抗性をライブラリーなどにより外来的に獲得した細胞のみが生存することを利用した方法である。この系の性能を評価するために、風疹ウイルスの増殖を抑制しうる遺伝子を導入した細胞の生存の程度を評価することを検討した。しかしながら、これまでに風疹ウイルスの増殖を抑制できる宿主遺伝子はほとんど同定されておらず、まずこれまでに他のウイルスへの抗ウイルス活性が報告されているIFN応答性遺伝子（ISG）の風疹ウイルス抑制能について解析した。16種類のISGを上述の風疹ウイルス高感受性培養細胞に発現させたところ、6つのISGが風疹ウイルスの増殖を有意に抑制できることが明らかとなった。その中の2種類のISG発現細胞に、HSV-TK発現組換え風疹ウイルスを感染させたところ、ISG非発現細胞が全滅するタイミングでも、細胞が50~70%生存することが確認できた。このことから本スクリーニング系は、各種ライブラリーなどを用いて、ウイルス抵抗性因子を同定するための有用なツールであることが期待できた。

The host anti-virus factor is the same as that of the host, and the active virus is detected in the CRISPR-dCAS9 virus. The rash is known to be active. In the year of Ling and 4, the above-mentioned Linghe, the above-mentioned products have been activated in the first place, and in the last year of the year, they have been detected in the first place, and in the last year of the year, they have been activated in the first place, and in the last year. This method, the host system, the CRISPR-Cas9 method, the IFN method, the host, and host. Originally, there was an infection caused by cytopathic disease (HSV-TK), and the infection was caused by infection. The new virus rash, the resistance, the cell, the survival, the use of the method. In terms of performance, disease, rash, colonization, inhibition, cell survival, cell survival. The rash was suppressed by the host, the host, 16 of the above-mentioned ISG, the cells of high susceptibility culture showed that the colonization of mice infected with rash and 6-year-old ISG was intentionally inhibited. There are two types of ISG cells in this group, one in which the virus is infected, one in which the virus is infected, the other in which the whole cell is not present, and one in which 50 percent of the cells are alive. This system, all kinds of equipment, and resistance factors are the same as those used in this system.