ウイルス感染を制御する宿主の新規抗ウイルス因子の同定

ウイルス感染を制御する宿主の抗ウイルス因子を同定することを目標とし、CRISPR-dCAS9遺伝子発現活性化型ライブラリーと風疹ウイルスを用いたスクリーニングを計画している。令和4年度は、上述の遺伝子発現活性化型ライブラリーの導入に先立って、昨年度までに構築した組換え風疹ウイルスによる細胞死を指標としたスクリーニング系の条件検討、およびその性能評価を実施した。本スクリーニング法は、宿主インターフェロン（IFN）経路をCRISPR-Cas9法によるゲノム編集により欠損させ、風疹ウイルスが高効率に増殖できるように改変した培養細胞を用い、本来は細胞障害性をほとんど有しない風疹ウイルスに自殺遺伝子である単純ヘルペスウイルスのチミジンキナーゼ（HSV-TK）を導入した組換え風疹ウイルスを感染させた際に、新たに風疹ウイルス抵抗性をライブラリーなどにより外来的に獲得した細胞のみが生存することを利用した方法である。この系の性能を評価するために、風疹ウイルスの増殖を抑制しうる遺伝子を導入した細胞の生存の程度を評価することを検討した。しかしながら、これまでに風疹ウイルスの増殖を抑制できる宿主遺伝子はほとんど同定されておらず、まずこれまでに他のウイルスへの抗ウイルス活性が報告されているIFN応答性遺伝子（ISG）の風疹ウイルス抑制能について解析した。16種類のISGを上述の風疹ウイルス高感受性培養細胞に発現させたところ、6つのISGが風疹ウイルスの増殖を有意に抑制できることが明らかとなった。その中の2種類のISG発現細胞に、HSV-TK発現組換え風疹ウイルスを感染させたところ、ISG非発現細胞が全滅するタイミングでも、細胞が50~70%生存することが確認できた。このことから本スクリーニング系は、各種ライブラリーなどを用いて、ウイルス抵抗性因子を同定するための有用なツールであることが期待できた。

ウイルス感染を制御する宿主の抗ウイルス因子を同定することを目標とし、CRISPR-dCAS9遺伝子発現活性化型ライブラリーと風疹ウイルスを用いたスクリーニングを計画している。令和4年度は、上述の遺伝子発現活性化型ライブラリーの導入に先立って、昨年度までに構築した組換え風疹ウイルスによる細胞死を指標としたスクリーニング系の条件検討、およびその性能評価を実施した。本スクリーニング法は、宿主インターフェロン（IFN）経路をCRISPR-Cas9法によるゲノム編集により欠損させ、風疹ウイルスが高効率に増殖できるように改変した培養細胞を用い、本来は細胞障害性をほとんど有しない風疹ウイルスに自殺遺伝子である単純ヘルペスウイルスのチミジンキナーゼ（HSV-TK）を導入した組換え風疹ウイルスを感染させた際に、新たに風疹ウイルス抵抗性をライブラリーなどにより外来的に獲得した細胞のみが生存することを利用した方法である。この系の性能を評価するために、風疹ウイルスの増殖を抑制しうる遺伝子を導入した細胞の生存の程度を評価することを検討した。しかしながら、これまでに風疹ウイルスの増殖を抑制できる宿主遺伝子はほとんど同定されておらず、まずこれまでに他のウイルスへの抗ウイルス活性が報告されているIFN応答性遺伝子（ISG）の風疹ウイルス抑制能について解析した。16種類のISGを上述の風疹ウイルス高感受性培養細胞に発現させたところ、6つのISGが風疹ウイルスの増殖を有意に抑制できることが明らかとなった。その中の2種類のISG発現細胞に、HSV-TK発現組換え風疹ウイルスを感染させたところ、ISG非発現細胞が全滅するタイミングでも、細胞が50~70%生存することが確認できた。このことから本スクリーニング系は、各種ライブラリーなどを用いて、ウイルス抵抗性因子を同定するための有用なツールであることが期待できた。