ヒトパピローマウイルス潜伏持続感染に関与する転写因子の探索

寻找参与潜伏持续性人乳头瘤病毒感染的转录因子

• 批准号: 21K07047
• 负责人: 石井 克幸
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: National Institute of Infectious Diseases
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K07047/
• 关键词: HPV; 複製; LCR; 転写因子; HOXC13; 潜伏持続感染

HPV16,18型初期遺伝子プロモーターの活性化に関わる新規転写因子を探索した。HPVゲノム複製と保持能を有するヒト角化細胞NIKSの網羅的遺伝子発現解析とHPV初期プロモーター制御領域(LCR)結合転写因子予測から、JDP2, CEBPD, FOXL1, FOXP3, HOXC10, MAFB, ZNF750, FOXO1, LYL1, GTF2F2, TSC22D3, ZFP42を選択した。ここから、siRNAによる遺伝子ノックダウンとルシフェラーゼをレポーターにした初期遺伝子プロモーター活性測定および定量PCRによるHPV初期遺伝子発現解析によりJDP2, DEBPD, LYL1まで絞った。HOXC13とJDP2, DEBPD, LYL1の発現ベクターをそれぞれNIKS細胞に導入し、HPV16, 18型のプロモーター活性を測定した。HOXC13のベクターは活性を上昇させたが、JDP2, DEBPD, LYL1には変化がなかった。HOXC13発現ベクターを子宮頸外部細胞Ect1および子宮頸内部細胞End1に導入し、HPV16,18型のプロモーター活性を測定した。Ect1, End1ともに活性の上昇が観測され、特にEct1細胞における16型プロモーター活性の上昇が顕著であった。HOXC13はHPV16,18型の初期遺伝子の発現を正に調節することが遺伝子導入実験でも示された。HOXC13ノックアウトNIKS細胞(NIKS/HOXC13-KO細胞)をレンチウイルスによるCRISPR/Cas9システムで作成した。

HPV16,18 early stage gene mutation and activation related to the new writing factors to explore. HPV replication and maintenance ability are present in keratinocytes NIKS and the expression of HPV early stage control domain (LCR) is determined by combining the predicted expression factors, JDP2, CEBPD, FOXL1, FOXP3, HOXC10, MAFB, ZNF750, FOXO1, LYL1, GTF2F2, TSC22D3 and ZFP42. HPV siRNA gene expression analysis JDP2, DEBPD, LYL1 gene expression analysis JDP2, DEBPD, LYL1 gene expression analysis JDP2, DEBPD, LYL1 gene expression analysis HOXC13, JDP2, DEBPD, LYL1 gene expression was detected in NIKS cells and HPV16, 18 gene expression was determined. HOXC13, DEBPD, LYL1, etc. HOXC13 was detected in cervical outer cells and cervical inner cells, and HPV16,18 was detected in cervical inner cells. Ect1, End1 and Ect1 cells showed an increase in activity, especially in Ect1 cells. HOXC13 is actively regulating the development of HPV16,18 early stage genes, and the introduction of these genes is also indicated. HOXC13-KO cells (NIKS/HOXC13-KO cells) have been successfully transformed into CRISPR/Cas9 cells.