急性骨髄性白血病のエクソン・スキップ治療に向けた基盤的研究

外显子跳跃治疗急性髓系白血病的基础研究

• 批准号: 21K07218
• 负责人: 坂下 暁介
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Shimane University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K07218/
• 关键词: 急性骨髄性白血病; エクソンスキップ

NPM1.3のスプライシングに携わる領域を同定しNPM1.3の選択率を上昇させる方法論の確立を目指した。NPM1ゲノムのうちExon7-Exon12 (約12kb)をクローニングし、mini geneベクターを作製した。このmini geneをヒト由来の293T細胞に導入すると、NPM1.1とNPM1.3の両方が発現した。mini geneから発現したNPM1.1とNPM1.3の比率（NPM比）を内在性NPM1のNPM比と比較すると、mini geneにおいてNPM1.3の選択率がやや低かったことから、NPM1.3の選択には今回クローニングしたExon7-Exon12の領域以外も関与する可能性が考えられた。しかしながら、ヒトNPM1ゲノムの全長は23kbに及ぶため、遺伝子導入効率の観点から、mini geneのサイズをこれ以上大きくするのは現実的ではないと考えた。そこで、クローニングしたExon7-Exon12の範囲内においてNPM1.3の選択に関与する領域を検討した。その結果、intron7とintron8のいずれかを欠損したmini geneではNPM1.3の選択効率の低下が見られ、intron7とintron8を両方欠損するとさらに低下することが明らかとなった。次にintron7 (約700bp)をいくつかにセクションに分割し、セクションごとに欠損させて、NPｍ1.3の選択効率への影響を検討したが、コントロールとの差は認められなかった。一方、Exon10を同様のアプローチでいくつかのセクションに分割したところ、欠損することによってNPM1.3の選択効率が上昇する領域を同定した。よってこの領域は、通常NPM1.3の選択に対して抑制的に作用するものの、欠損することによって抑制が解除されたと考えられる。

NPM1.3's selection rate is increasing and the methodology is being established. NPM1: Exon7-Exon12 (approx. 12kb), mini gene, etc. The mini gene was introduced into 293T cells and NPM1.1 and NPM1.3 were discovered. The ratio of NPM1.1 to NPM1.3 (NPM ratio) is intrinsic to the NPM ratio of NPM1. The selection ratio of NPM1.3 in mini gene is relatively low. The selection ratio of NPM1.3 is relatively low. The possibility of NPM1.3 being selected outside the domain of Exon7-Exon12 is examined. The total length of NPM1 is 23kb, and the gene introduction rate is 23 kb. This is a discussion of the field of NPM1.3 selection in Exon7-Exon12. The result is that intron7 and intron8 have a low selection rate. Subintron 7 (about 700bp) is divided into two parts, the first part is divided into two parts, the second part is divided into two parts, the third part is divided into two parts, the fourth part is divided into two parts, the fourth part is divided into three parts, the fourth part is divided into four parts One side, Exon10, and the other side, Exon 10, are the same. In this case, NPM1.3 is usually selected for suppression.