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免疫機能付与した小腸オルガノイドの活用による新生児期難治性腸炎の研究

具有免疫功能的小肠类器官对新生儿难治性小肠结肠炎的研究

基本信息

批准号：
21K07764
负责人：
町田正和
金额：
$ 2.66万
依托单位：
National Center for Child Health and Development
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2023-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

これまで培養ディッシュ内で蠕動様運動、吸収や分泌能などのヒト腸管の機能を有する立体組織（ミニ小腸）の創成に世界で初めて成功した。この技術を基盤として、小腸幹細胞（LGR5-EGFP）と腸管神経叢の成熟化（PHOX2B-RFP）を同時に可視化できるミニ小腸に作製に成功した。本研究では、マクロファージ内在化ミニ小腸（M-ミニ小腸）へリンパ球前駆細胞を導入することでマクロファージとリンパ球を内在化したミニ小腸（M/L-ミニ小腸）の作製を確実に実施できる系を構築した。さらに、M-ミニ小腸に対して炎症惹起モデルとして汎用されている腸内細菌由来リポポリサッカライド（LPS）の反応性を検証するため、LPSの腸管粘膜上皮側の受容体となるToll様受容体（TLR）の発現動態を解析した。腸管内組織マクロファージの極性マーカーであるCD68, CD86, CD163, CCL2, SOCS3, STAT6, IL6とIL10についてTGFβ受容体1の選択的阻害剤であるSB431542を添加したM-ミニ小腸も加え解析した。その結果、M-ミニ小腸ではミニ小腸（マクロファージ無）と比較しCD86, CD163, CCL2, SOCS3, STAT6やIL6で高い発現が認められた。TLRの中でもLPSの受容体となるTLR4の発現は認められるものの非常に弱い発現で生体小腸と同様であることが免疫染色上でも確認できた。これらより、M-ミニ小腸は粘膜上皮バリア性破綻・炎症惹起モデルとなり新生児難治性腸炎発症機序の開発を進める有望なバイオモデルであることが強く示唆された。

This is the first time in the world that a three-dimensional tissue (small intestine) has been successfully created by culturing and secreting intestinal motility, absorbing and secreting energy, and functioning intestinal tract. This technique was successful in visualizing small intestine stem cells (LGR5-EGFP) and intestinal plexus maturation (PHOX2B-RFP) simultaneously. In this study, we constructed a system to ensure the implementation of the internalization of small intestine (M/L) by introducing small intestine (M/L) cells into small intestine. In this paper, we analyze the dynamics of Toll Receptors (TLR) in intestinal mucosa epithelial side of LPS. CD68, CD86, CD163, CCL2, SOCS3, STAT6, IL6 and IL10 are selected as inhibitors of TGFβ receptor 1 in intestinal tissues. SB431542 is added to the analysis of small intestine. The results of the test, M-test, M-test, The expression of LPS in TLR was confirmed by immunostaining. The development of neonatal refractory enteritis is expected to progress.