萎縮性胃炎オルガノイドからの腸上皮化生、腸型胃がん発がんモデルの構築

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これまでの臨床検体での解析から健常部ではLGR5陽性細胞は検出困難であったが、萎縮性胃炎では有意にLGR5発現細胞が増加しており、萎縮性胃炎から樹立したオルガノイドも多くがLGR5陽性であった。オルガノイド培養系においてWnt3a、Nogginを添加しない場合はオルガノイド形成が見られず、オルガノイド形成及びLGR5陽性細胞の維持にはWNTシグナルが必須であった。臨床検体においては腺底部にWNT3aを発現する細胞が認められ、現在免疫染色を行い、これらWnt3a発現細胞の同定を行っている。LATS2 KOによる腸上皮化生のメカニズムとして、LATS2ノックアウト後に定量的PCRによりID4の発現亢進を認め、BMPシグナルの関与が示唆された。LATS2またはRUNX3のみのノックアウトではマウスにおける造腫瘍性を確認できなかったが、これらのノックアウトに加えてTP53あるいはSMAD4をノックアウトすることで、マウスにおける造腫瘍性が確認できた。さらにTP53と比較して、SMAD4 double knock outオルガノイドを移植した場合では、腫瘍内に浸潤するCD68陽性マクロファージの有意な増加とCCL2の mRNA発現が亢進しており、腸型胃がんにおける炎症性の微小環境構築にSMAD4が関与する可能性が示唆された。コヒーシン構成分子の異常による染色体不安定性の誘導を目的に、胃がんAGS細胞株を用いて予備実験を行った。STAG1遺伝子をCRISPR-Cas9システムで用いてノックアウトし、染色体不安定性をmFISHで解析を行ったが、STAG1遺伝子のノックアウトによる染色体異常の増加は認めなかった。