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萎縮性胃炎オルガノイドからの腸上皮化生、腸型胃がん発がんモデルの構築

萎缩性胃炎类器官肠化生及肠型胃癌癌变模型的构建

基本信息

批准号：
21K07915
负责人：
有山寛
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

これまでの臨床検体での解析から健常部ではLGR5陽性細胞は検出困難であったが、萎縮性胃炎では有意にLGR5発現細胞が増加しており、萎縮性胃炎から樹立したオルガノイドも多くがLGR5陽性であった。オルガノイド培養系においてWnt3a、Nogginを添加しない場合はオルガノイド形成が見られず、オルガノイド形成及びLGR5陽性細胞の維持にはWNTシグナルが必須であった。臨床検体においては腺底部にWNT3aを発現する細胞が認められ、現在免疫染色を行い、これらWnt3a発現細胞の同定を行っている。LATS2 KOによる腸上皮化生のメカニズムとして、LATS2ノックアウト後に定量的PCRによりID4の発現亢進を認め、BMPシグナルの関与が示唆された。LATS2またはRUNX3のみのノックアウトではマウスにおける造腫瘍性を確認できなかったが、これらのノックアウトに加えてTP53あるいはSMAD4をノックアウトすることで、マウスにおける造腫瘍性が確認できた。さらにTP53と比較して、SMAD4 double knock outオルガノイドを移植した場合では、腫瘍内に浸潤するCD68陽性マクロファージの有意な増加とCCL2の mRNA発現が亢進しており、腸型胃がんにおける炎症性の微小環境構築にSMAD4が関与する可能性が示唆された。コヒーシン構成分子の異常による染色体不安定性の誘導を目的に、胃がんAGS細胞株を用いて予備実験を行った。STAG1遺伝子をCRISPR-Cas9システムで用いてノックアウトし、染色体不安定性をmFISHで解析を行ったが、STAG1遺伝子のノックアウトによる染色体異常の増加は認めなかった。

Analysis of this clinical model shows that it is difficult to detect LGR5-positive cells in normal areas, that there is an increase in LGR5-positive cells in atrophic gastritis, and that there is an increase in LGR5-positive cells in atrophic gastritis. In addition to Wnt3a and Noggin, Wnt3a and Noggin are necessary for the formation of Wnt3a and LGR5 positive cells. In clinical specimens, cells expressing WNT3a were identified at the base of the gland, and immunostaining was performed to identify these WNT3a-expressing cells. LATS2 KO gene expression in intestinal metaplasia was detected by quantitative PCR after LATS2 KO gene expression in ID4, BMP gene expression in intestinal metaplasia, and expression in intestinal metaplasia. LATS2 is a member of RUNX3, which is a member of SMAD4. It is a member of SMAD4, which is a member of SMAD4. In addition, TP53 and SMAD4 double knock out may be involved in the establishment of inflammatory microenvironment in intestinal type stomach, and the possibility of CD68 positive expression and CCL2 mRNA hyperactivity in tumor infiltration may be suggested. AGS cell lines are prepared for induction of chromosomal instability in the presence of chromosomal component abnormalities. STAG1 gene CRISPR-Cas9 gene sequence analysis, chromosome instability mFISH analysis, STAG1 gene CRISPR-Cas9 gene sequence analysis, chromosome abnormality detection