C型肝炎ウイルスおよび新型コロナウイルス複製に必要な膜小胞の形成メカニズムの解析

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本研究の目的は、C型肝炎ウイルス(HCV)をモデルとしてdoble membrane vesicles (DMV)形成に関与する宿主因子を見出し、DMV形成のメカニズムを明らかにすることである。HCVのDMV形成についてはNS5AがDMV形成に必須なことが知られている。そこで、Huh7細胞にサブゲノミックレプリコンを導入し、NS5Aで免疫沈降反応を行なって、プロテオーム解析を行なったところ、NS5A結合タンパクとして11β-Hydroxysteroid dehydrogenase (HSD11)を見出した。さらに、脂肪滴周辺膜の比較プロテオーム解析からもHSD11を見出し、HSD11がウイルス粒子産生に重要な役割を持つことを示した。HSD11は多くの臓器に広く分布している。一方、HSD13はHSD11と近い構造を持ち、機能も類似しているが、肝細胞に主に存在している。そこで、HSD13とHCV粒子形成の関連性を調べている。SARS-CoV-2に感染したVero細胞及び腸管オルガノイドからRNAおよびDNAを抽出し、qRT-PCR、qPCRを行った結果、RNAとDNAの両方からウイルス遺伝子の増幅が観察された。また、COVID-19罹患後の大腸検体を用いた解析でも、RNAとDNAの両方からランダムに増幅されていることが明らかになり、SARS-CoV-2が逆転写される可能性が示唆されている。