C型肝炎ウイルス複製に関与する宿主因子の同定とウイルス複製機構の解析

丙型肝炎病毒复制涉及的宿主因素鉴定及病毒复制机制分析

• 批准号: 19590799
• 负责人: 相崎 英樹
• 金额: $ 2.91万
• 依托单位: National Institute of Infectious Diseases
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-19590799/
• 关键词: C型肝炎ウイルス; 複製複合体; プロテオミックス; レプリコン; creatine kinase B; 界面性剤不溶性膜分画; 脂質ラフト; サブゲノムレプリ; 界面活性剤不溶性膜分画; 分子シャペロン; NS5B蛋白

HCVは感染細胞内でウイルス蛋白と宿主因子からなる複製複合体を形成し効率良くウイルス複製を行っていると考えられている。本研究はプロテオミックス技術により、HCV複製複合体(RC)を構成する宿主因子を同定し、その機能を解析することを目的とした。サブゲノムレプリコン(genotype 1b)を有するHuh7細胞からHCVRCを含む界面活性剤不溶性膜分画を抽出し、Huh7細胞と比較したところ、の結果、約1500個の蛋白が検出され、62個がレプリコン細胞で2倍以上蛋白量が増加しており、それらはHeat shock protein、Chaperone、Enzyme、Receptor signaling complex、Ubiquitin proteasome system proteinなどに分類された。HCV複製複合体を構成する宿主因子として、細胞内のATP輸送、ATP/ADP濃度調節に働くcreatine kinase B(CKB)を同定した。遺伝子型1b及び2a由来のHCVレプリコン細胞において、CKB遺伝子のノックダウン、dominant negative CKBの強制発現あるいはCKB阻害剤cyclocreatine処理によりHCV RNA複製の有意な抑制が観察されCKBがHCV RNA複製調節に関与することが明らかとなった。さらに、セミインタクト細胞を用いたHCV replicaseアッセイ系において、CKB添加によりHCV複製が亢進されることを見出した。

HCV infection in the cell, the host factor, replication complex formation, good rate of HCV replication The aim of this study is to identify the host factors and analyze the function of HCV replication complex (RC). The results showed that about 1500 proteins were detected in Huh7 cells, and the protein content of 62 Huh7 cells increased by more than 2 times, including Heat shock protein, Chaperone, Enzyme, Receptor signaling complex and Ubiquitin proteasome system protein. HCV replication complex is composed of host factors, intracellular ATP transport, ATP/ADP concentration regulation, and creatine kinase B(CKB). HCV RNA replication is inhibited by CKB inhibitors, cyclocreatine treatment, and intentional inhibition of HCV RNA replication. CKB is involved in the regulation of HCV RNA replication. HCV replication is not detected in the presence of CKB.

项目成果

Involvement of the PA28gamma-dependent pathway in insulin resistance induced by hepatitis C virus core protein.

• 发表时间: 2007
• 期刊: Journal of virology
• 影响因子: 5.4
• 作者: Hironobu Miyamoto;K. Moriishi;K. Moriya;S. Murata;Keiji Tanaka;Tetsuro Suzuki;T. Miyamura;K. Koike;Y. Matsuura

SYNCRIP (synaptotagmin-binding, cytoplasmic RNA-interacting protein) is a host factor involved in hepatitis C virus RNA replication.

• DOI: 10.1016/j.virol.2009.01.018
• 发表时间: 2009-04-10
• 期刊: VIROLOGY
• 影响因子: 3.7
• 作者: Liu, Helene Minyi;Aizaki, Hideki;Choi, Keum S.;Machida, Keigo;Ou, James J. -H.;Lai, Michael M. C.
• 通讯作者: Lai, Michael M. C.

An adaptive mutation in E2 glycoprotein allows an efficient production of HCV particles with the epitope-tagged envelope.

E2 糖蛋白的适应性突变允许有效生产带有表位标记包膜的 HCV 颗粒。

• 发表时间: 2007
• 作者: Takahashi H;Suzuki T;et. al.
• 通讯作者: et. al.

A Critical Role of Virion-Associated Cholesterol and Sphingolipid in Hepatitis C Virus Infection

病毒颗粒相关胆固醇和鞘脂在丙型肝炎病毒感染中的关键作用

• 发表时间: 2008
• 期刊: J Virol. 82
• 作者: Aizaki H;Morikawa K;Fukasawa M;Hara H;Inoue Y;Tani H;Saito K;Nishijima M;Hanada K;Matsuura Y;Lai MM;Miyamura T;Wakita T;Suzuki T.
• 通讯作者: Suzuki T.

The cholesterol and sphingolipids of hepatitis C virus particles play critical roles in the viral infectivity

丙型肝炎病毒颗粒的胆固醇和鞘脂在病毒感染性中发挥关键作用

• 发表时间: 2007
• 作者: Aizaki H;Fukasawa M;et. al.
• 通讯作者: et. al.