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1細胞解析結果に基づく肺癌の発癌責任間葉サブクラスターとCAF起源細胞の決定

基于单细胞分析结果确定肺癌致癌的间质亚簇和CAF起源细胞

基本信息

批准号：
21K08159
负责人：
柳重久
金额：
$ 2.58万
依托单位：
University of Miyazaki
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

AT2でのPten欠損が与える肺胞ニッチ間葉細胞(MANC)と筋線維芽前駆細胞(AMP)数への影響を解析した。sftpcCreERT2:PtenFl/Flマウスと、PDGFREGFPマウスとAxin2mTurquoise2マウスを交配し、AT2でPten欠損かつMANCとAMPをlineage tracingするマウスを作成した。FACS解析の結果、コントロールマウスとAT2-PtenKOマウスでは、MANC数とAMP数は同等であった。AT2-Pten欠損が発癌前に肺間葉細胞クラスターを摂動するメカニズムについて、16週齢ならびに1歳齢(未発癌)のAT2-PtenKOマウスよりAT2を単離し、老化細胞数をFACSで解析した。その結果、AT2-PtenKOマウスでは未発病期からAT2での細胞老化が加速し、高齢期でも老化細胞が存続していた。また、高齢期でAT2-肺間葉細胞cell circuitの不良ミトコンドリアの蓄積と酸素消費率の亢進、ROS蓄積が生じていた。AT2-Pten欠損による発癌の性差を検討し、雌のAT2特異的Pten欠損マウスでも雄と同等に肺腺癌を自然発癌することがわかった(雄:20/28, 71%, 雌:9/11, 82%)。異なる肺腺癌モデル解析による発癌責任間葉サブクラスター普遍性の確認について、AT2特異的RhoA欠損マウスが1.5歳齢で肺腺癌を自然発症することを見出した。未発病期のAT2-RhoA欠損マウスとコントロールマウスから肺間葉細胞を単離、全サンプルの凍結保存を完了した。令和5年度にシングルセルRNA解析を行う。CAF起源について、肺腺癌を発症したAT2特異的Pten欠損マウスのtumor-bearing lungより肺間葉細胞をFACSで単離した。7割のサンプリングを完了した。全サンプルを回収次第、令和5年度にシングルセルRNA解析を行う。

Analysis of the effect of Pten deficiency on the number of mesenchymal cells (MANC) and pre-embryonic cells (AMP) in AT2 sftpcCreERT2:PtenFl/Fl, PDGFREGFP Axin2mTurquoise2, AT2 Pten MANC AMP lineup tracing FACS analysis results, MANC number and AMP number are equal FACS analysis of AT2-PtenKO cell counts in lung mesenchymal cells prior to cancer development AT 16 weeks and 1 year old (no cancer). As a result, AT2-PtenKO cells were accelerated in the early stages of the disease, and aged cells were preserved in the early stages. At the peak of AT2-lung mesenchymal cell cycle, the accumulation of ROS and the increase of acid consumption rate occur. The sex difference in cancer development due to AT2-Pten deficiency is discussed. Female-specific AT2-Pten deficiency may lead to the same natural development of lung adenocarcinoma in males (males:20/28, 71%, females:9/11, 82%). Analysis of lung adenocarcinoma and identification of the prevalence of AT2-specific RhoA deficiency The AT2-RhoA in the immature stage was isolated and frozen. The analysis of RNA was carried out in the fifth year. CAF origin, lung adenocarcinoma development, AT2-specific Pten deficiency, tumor-bearing lung cancer, FACS analysis 7. Cut off the tape. The analysis of RNA in the whole group was carried out in the first, second and fifth years.