1細胞解析結果に基づく肺癌の発癌責任間葉サブクラスターとCAF起源細胞の決定

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AT2でのPten欠損が与える肺胞ニッチ間葉細胞(MANC)と筋線維芽前駆細胞(AMP)数への影響を解析した。sftpcCreERT2:PtenFl/Flマウスと、PDGFREGFPマウスとAxin2mTurquoise2マウスを交配し、AT2でPten欠損かつMANCとAMPをlineage tracingするマウスを作成した。FACS解析の結果、コントロールマウスとAT2-PtenKOマウスでは、MANC数とAMP数は同等であった。AT2-Pten欠損が発癌前に肺間葉細胞クラスターを摂動するメカニズムについて、16週齢ならびに1歳齢(未発癌)のAT2-PtenKOマウスよりAT2を単離し、老化細胞数をFACSで解析した。その結果、AT2-PtenKOマウスでは未発病期からAT2での細胞老化が加速し、高齢期でも老化細胞が存続していた。また、高齢期でAT2-肺間葉細胞cell circuitの不良ミトコンドリアの蓄積と酸素消費率の亢進、ROS蓄積が生じていた。AT2-Pten欠損による発癌の性差を検討し、雌のAT2特異的Pten欠損マウスでも雄と同等に肺腺癌を自然発癌することがわかった(雄:20/28, 71%, 雌:9/11, 82%)。異なる肺腺癌モデル解析による発癌責任間葉サブクラスター普遍性の確認について、AT2特異的RhoA欠損マウスが1.5歳齢で肺腺癌を自然発症することを見出した。未発病期のAT2-RhoA欠損マウスとコントロールマウスから肺間葉細胞を単離、全サンプルの凍結保存を完了した。令和5年度にシングルセルRNA解析を行う。CAF起源について、肺腺癌を発症したAT2特異的Pten欠損マウスのtumor-bearing lungより肺間葉細胞をFACSで単離した。7割のサンプリングを完了した。全サンプルを回収次第、令和5年度にシングルセルRNA解析を行う。