DIHS治療薬の合理的開発を志向したHLAの構造学的研究

本研究の目的は、HLA-B*13:01を持つ人がDIHSを引き起こす薬物を服用してもアレルギー反応を起こさないペプチド様医薬品開発の指針を得ることである。そこで本研究ではまず、HLA-B*13:01単独構造およびHLA-B*13:01-アロプリノール複合体、フェノバルビタール複合体の立体構造をX線結晶構造解析の手法を用いて明 らかにすることを目指している。多くのHLAはβ2-Microglobulinとの複合体での立体構造解析が行われているため、本研究に関しても大量のHLA-B*13:01およびβ2-Microglobulinが必要であると考えられる。そこで、HLA-B*13:01およびβ2- Microglobulinの大量発現の最適化条件の検討を行った。HLA-B*13:01に関しては大量培養後、尿素で可溶化し、TALONカラムを用いた金属アフィニティークロマトグラフィー、ゲルろ過クロマトグラフィーの2種類のクロマトグラフィーを行うことでSDS-PAGE上、単一バンドのHLA-B*13:01を得ることに成功した。しかし、未だに精製したβ2-Microgloblinが得られていないので、大量にβ2-Microgloblinを得るために、様々な発現ベクター中にβ2-Microgloblin遺伝子を組み込んだβ2-Mcrogloblin発現ベクターを作成した。大量培養後、TALONカラムを用いた金属アフィニティークロマトグラフィー、ゲルろ過クロマトグラフィーの2種類のクロマトグラフィーを行うことでSDS-PAGE上、単一バンドのβ2-Microglobulinを得ることに成功した。

本研究の目的は、HLA-B*13:01を持つ人がDIHSを引き起こす薬物を服用してもアレルギー反応を起こさないペプチド様医薬品開発の指針を得ることである。そこで本研究ではまず、HLA-B*13:01単独構造およびHLA-B*13:01-アロプリノール複合体、フェノバルビタール複合体の立体構造をX線結晶構造解析の手法を用いて明 らかにすることを目指している。多くのHLAはβ2-Microglobulinとの複合体での立体構造解析が行われているため、本研究に関しても大量のHLA-B*13:01およびβ2-Microglobulinが必要であると考えられる。そこで、HLA-B*13:01およびβ2- Microglobulinの大量発現の最適化条件の検討を行った。HLA-B*13:01に関しては大量培養後、尿素で可溶化し、TALONカラムを用いた金属アフィニティークロマトグラフィー、ゲルろ過クロマトグラフィーの2種類のクロマトグラフィーを行うことでSDS-PAGE上、単一バンドのHLA-B*13:01を得ることに成功した。しかし、未だに精製したβ2-Microgloblinが得られていないので、大量にβ2-Microgloblinを得るために、様々な発現ベクター中にβ2-Microgloblin遺伝子を組み込んだβ2-Mcrogloblin発現ベクターを作成した。大量培養後、TALONカラムを用いた金属アフィニティークロマトグラフィー、ゲルろ過クロマトグラフィーの2種類のクロマトグラフィーを行うことでSDS-PAGE上、単一バンドのβ2-Microglobulinを得ることに成功した。