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Development of CAR-T cells to treat recurring leukemia post-HCT by targeting mismatched HLA-DP

开发 CAR-T 细胞，通过靶向不匹配的 HLA-DP 来治疗 HCT 后复发性白血病

基本信息

批准号：
21K08369
负责人：
赤塚美樹
金额：
$ 2.58万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究の目的は同種造血細胞移植例の第一死因となっている移植後再発白血病の予防・治療法の開発である。HLA一致非血縁者間移植を受けた患者の7割にHLA-DP不適合が発生する。この不適合HLA-DP型分子に特異的な抗体を作成し、キメラ抗原受容体へ利用する。初年度はハイブリドーマ産生に用いるマウス骨髄腫細胞にCD64分子が発現するようにし、狙った抗原に特異的な抗体を産生するハイブリドーマ細胞のみが蛍光で染色されるようにした。以上の条件設定に基づき、HLA-DPB1*09:01／DPA1*02:01（以下DPB9A2）ヘテロダイマーでのBalb/cマウス免疫を開始した。免疫条件として、(1) DPB9A2発現マウスNIH3T3細胞のみで3回免疫法、(2) DPB9A2発現細胞で2回＋DPB9A2精製蛋白で1回の組み合わせ法、(3) DPB9A2精製蛋白で3回法の3方法を試みた。(1)ではマウス血清にはHLA-DP分子のみならず、同じクラスII型HLA分子であるHLA-DR、-DQに対する抗体も同等に産生された。(3)では抗体価が著しく低く、免疫が不十分と判明した。（2）ではHLA-DR, -DQへの反応も出るものの、よりHLA-DPへの反応が強くなったため、以後の実験は（2）の組み合わせ法を用いた。モデル実験と同様にCD64を強制発現できるようにしたハイブリドーマを作成して、免疫に用いたDPB9A2蛋白にPE、HLA-DR/DQミックス蛋白にAPCを標識しハイブリドーマの表現形質を解析したところ、44％が双方とも陰性、22％が双方とも陽性、32％がHLA-DR/DQに陽性、1.3％がDPに陽性となった。このDP陽性ハイブリドーマをソーティングして増殖させたところ4クローンが得られ、うち2つはHLA-DR/DQミックス蛋白よりもDPB9A2に対して有意な反応性を示すことが確認出来た。

本研究の目的は同種造血細胞移植例の第一死因となっている移植後再発白血病の予防·治療法の開発である。HLA一致非造血干细胞移植受者7裂位HLA-DP不相合造血干细胞增生。免疫不结合HLA-DP型分子特异性的免疫抗体组成免疫原，免疫抗体原受容体可利用。初始年度免疫缺陷病毒感染新生儿应用免疫球蛋白诱导骨肉瘤细胞CD64分子表达，免疫球蛋白抗原特异性的抗体染色新生儿免疫球蛋白诱导骨肉瘤细胞凋亡。以上条件下确定的基质抗体，HLA-DPB1*09：01/DPA1*02：01（以下DPB9A2），均为人免疫球蛋白，Balb/c为人免疫球蛋白。免疫条件筛选法，（1）DPB9A2嗜酸性粒细胞NIH3T3嗜酸性粒细胞3回免疫法，（2）DPB9A2嗜酸性粒细胞2回+DPB9A2嗜酸性蛋白酶1回免疫复合免疫法，（3）DPB9A2嗜酸性蛋白酶3回免疫法。(1)乙肝病毒血清学检测HLA-DP分子水平，同为乙肝病毒Ⅱ型HLA分子水平，HLA-DR，-DQ抗原抗体水平等均相同。(3)The results showed that the mechanical properties of the mechanical properties. (2)申请HLA-DR、-DQ反倾销诉讼，申请HLA-DP反倾销诉讼，以排除留置权（2）申请合并诉讼法适用。免疫组化法检测HLA-DR/DQ复合型CD64免疫抑制剂的免疫抑制活性，免疫组化法检测DPB9A2蛋白酶标PE，HLA-DR/DQ复合型APC免疫抑制剂的免疫表型，44%的双向免疫性，22%的双向免疫性，32%的HLA-DR/DQ免疫性，1.3%的DP免疫性。在DP非特异性免疫缺陷综合征患者中，发现了4例HLA-DR/DQ非特异性免疫缺陷蛋白申请表，其中2例HLA-DR/DQ非特异性免疫缺陷蛋白申请表，DPB9A2例HLA-DR/DQ非特异性免疫缺陷蛋白申请表，其中2例HLA-DR/DQ非特异性免疫缺陷蛋白申请表，其中2例HLA-DR/DQ非特异性免疫缺陷蛋白申请表。