Development of CAR-T cells to treat recurring leukemia post-HCT by targeting mismatched HLA-DP

本研究の目的は同種造血細胞移植例の第一死因となっている移植後再発白血病の予防・治療法の開発である。HLA一致非血縁者間移植を受けた患者の7割にHLA-DP不適合が発生する。この不適合HLA-DP型分子に特異的な抗体を作成し、キメラ抗原受容体へ利用する。初年度はハイブリドーマ産生に用いるマウス骨髄腫細胞にCD64分子が発現するようにし、狙った抗原に特異的な抗体を産生するハイブリドーマ細胞のみが蛍光で染色されるようにした。以上の条件設定に基づき、HLA-DPB1*09:01／DPA1*02:01（以下DPB9A2）ヘテロダイマーでのBalb/cマウス免疫を開始した。免疫条件として、(1) DPB9A2発現マウスNIH3T3細胞のみで3回免疫法、(2) DPB9A2発現細胞で2回＋DPB9A2精製蛋白で1回の組み合わせ法、(3) DPB9A2精製蛋白で3回法の3方法を試みた。(1)ではマウス血清にはHLA-DP分子のみならず、同じクラスII型HLA分子であるHLA-DR、-DQに対する抗体も同等に産生された。(3)では抗体価が著しく低く、免疫が不十分と判明した。（2）ではHLA-DR, -DQへの反応も出るものの、よりHLA-DPへの反応が強くなったため、以後の実験は（2）の組み合わせ法を用いた。モデル実験と同様にCD64を強制発現できるようにしたハイブリドーマを作成して、免疫に用いたDPB9A2蛋白にPE、HLA-DR/DQミックス蛋白にAPCを標識しハイブリドーマの表現形質を解析したところ、44％が双方とも陰性、22％が双方とも陽性、32％がHLA-DR/DQに陽性、1.3％がDPに陽性となった。このDP陽性ハイブリドーマをソーティングして増殖させたところ4クローンが得られ、うち2つはHLA-DR/DQミックス蛋白よりもDPB9A2に対して有意な反応性を示すことが確認出来た。

本研究の目的は同種造血細胞移植例の第一死因となっている移植後再発白血病の予防・治療法の開発である。HLA一致非血縁者間移植を受けた患者の7割にHLA-DP不適合が発生する。この不適合HLA-DP型分子に特異的な抗体を作成し、キメラ抗原受容体へ利用する。初年度はハイブリドーマ産生に用いるマウス骨髄腫細胞にCD64分子が発現するようにし、狙った抗原に特異的な抗体を産生するハイブリドーマ細胞のみが蛍光で染色されるようにした。以上の条件設定に基づき、HLA-DPB1*09:01／DPA1*02:01（以下DPB9A2）ヘテロダイマーでのBalb/cマウス免疫を開始した。免疫条件として、(1) DPB9A2発現マウスNIH3T3細胞のみで3回免疫法、(2) DPB9A2発現細胞で2回＋DPB9A2精製蛋白で1回の組み合わせ法、(3) DPB9A2精製蛋白で3回法の3方法を試みた。(1)ではマウス血清にはHLA-DP分子のみならず、同じクラスII型HLA分子であるHLA-DR、-DQに対する抗体も同等に産生された。(3)では抗体価が著しく低く、免疫が不十分と判明した。（2）ではHLA-DR, -DQへの反応も出るものの、よりHLA-DPへの反応が強くなったため、以後の実験は（2）の組み合わせ法を用いた。モデル実験と同様にCD64を強制発現できるようにしたハイブリドーマを作成して、免疫に用いたDPB9A2蛋白にPE、HLA-DR/DQミックス蛋白にAPCを標識しハイブリドーマの表現形質を解析したところ、44％が双方とも陰性、22％が双方とも陽性、32％がHLA-DR/DQに陽性、1.3％がDPに陽性となった。このDP陽性ハイブリドーマをソーティングして増殖させたところ4クローンが得られ、うち2つはHLA-DR/DQミックス蛋白よりもDPB9A2に対して有意な反応性を示すことが確認出来た。