転写因子GATA-2を介した造血幹細胞と造血微小環境の機能的連関の解明

阐明转录因子GATA-2介导的造血干细胞与造血微环境的功能关系

• 批准号: 21K08385
• 负责人: 藤原 亨
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K08385/
• 关键词: GATA-2; 造血微小環境; 造血幹細胞

造血不全症の代表疾患の一つである再生不良性貧血は、骨髄の造血幹細胞の減少と脂肪髄を特徴とする難治性疾患の一つである。これまでに申請者らのグループは、造血幹細胞と造血微小環境を構成する間葉系幹細胞の両者における転写因子GATA-2の発現低下が、造血細胞の減少と脂肪髄という二つの異常形質と深く関わることを見出してきた。しかしながら、造血幹細胞の質的異常が造血微小環境に与える影響については不明である。本研究においては、造血幹細胞特異的にGata2をノックアウトする方法として、Cre-loxPシステムを用いる。まずGATA2f/fマウスと，Rosa26領域にエストロゲンレセプターとCre融合蛋白をコードする配列が導入されたER-Creマウスを交配することにより，タモキシフェン投与にてGATA2がノックアウトされる条件付きノックアウトマウスを作製した。GATA2f/f/ER-Creマウスにタモキシフェンを腹腔内投与した後、GATA2のノックアウト効率を定性PCRによるゲノムDNAの組み換えや定量PCRによるmRNAの発現量にて確認した。同マウスの骨髄を評価したところ、Gata2ノックアウトマウスにおいては骨髄造血細胞の著明な減少を認めた。しかし、本マウスはGata2を発現するすべての細胞においてGata2をノックアウトするため、マウス造血幹細胞において高発現していると考えられている、Fgd5遺伝子のプロモーター領域の制御下にCreを発現させるマウスを用いて、造血幹細胞特異的にGata2をノックアウトさせるマウス（Fgd5-Cre-ER;Gata2flox/floxマウス）の確立を試みた。しかしながら、マウスFgd5遺伝子とマウスGata2遺伝子が同一染色体上で近接しており、Fgd5-CreとGata2floxを1つの染色体座に同時に発現させる点で苦慮している。

性贫血是造血衰竭最常见的疾病之一，是一种难治性疾病之一，其特征是骨髓和脂肪肌肉中造血干细胞的降低。迄今为止，申请人组发现造血细胞和间充质干细胞中转录因子GATA-2的表达降低，构成造血微环境的间质干细胞与两个异常特征深深相关：造血细胞和脂肪细胞dyspora降低。然而，尚不清楚造血干细胞中定性异常对造血微环境的影响。在这项研究中，CRE-LoxP系统被用作专门针对造血干细胞的GATA2的方法。首先，通过将GATA2F/F小鼠与ER-CRE小鼠跨越，其中将雌激素受体和编码CRE融合蛋白的序列引入ROSA26区域，从而产生了一种有条件的基因敲除小鼠，其中产生了他莫莫莫莫克斯夫妇给药的GATA2。在腹膜内对GATA2F/F/ER-CRE小鼠进行腹膜内施用后，通过定性PCR和mRNA表达水平通过定量PCR重新组合GATA2的敲除效率。当评估同一只小鼠的骨髓时，GATA2基因敲除小鼠的骨髓细胞会显着降低。但是，由于该小鼠在所有表达GATA2的细胞中都击倒了GATA2，因此我们尝试建立一只小鼠，该小鼠使用在FGD5基因的启动子区域控制的FGD5基因控制的CRE中表达CRE的小鼠，该小鼠在FGD5基因的控制下表达了高度表达的stemic seve in HeapOopoo的小鼠。然而，小鼠FGD5基因和小鼠GATA2基因在同一染色体上彼此接近，并且在同时在一个染色体基因座以同时表达FGD5-CRE和GATA2FLOX的事实。

项目成果

Altered transcription by GATA1 impairs autophagy and prevents ferroptosis in X-linked sideroblastic anemia

GATA1 改变的转录会损害自噬并预防 X 连锁铁粒幼细胞贫血中的铁死亡

• 发表时间: 2022
• 作者: Ono K;Fujiwara T;Shima H;Suzuki C;Takahashi N;Nishizawa H;Onodera K;Ichikawa S;Fukuhara N;Onishi Y;Hisayuki Y;Fujimaki S;Nakamura Y;Igarashi K;Harigae H
• 通讯作者: Harigae H

Exploring the mechanistic link between SF3B1 mutation and ring sideroblast formation in MDS

探索 MDS 中 SF3B1 突变与环形铁粒幼细胞形成之间的机制联系

• 发表时间: 2022
• 作者: Ochi T;Fujiwara T;Ono K;Suzuki C;Inoue D;Kato H;Onodera K;Ichikawa S;Fukuhara N;Onishi Y;Yokoyama H;Nakamura Y;Harigae H
• 通讯作者: Harigae H

Impact of FECH deficiency on ring sideroblast formation in erythroblasts

FECH 缺乏对成红细胞中环状铁粒幼细胞形成的影响

• 发表时间: 2022
• 作者: Nikaido M;Fujiwara T;Suzuki C;Ono K;Kato H;Onodera K;Ichikawa S;Fukuhara N;Onishi Y;Yokoyama H;Nakamura Y;Harigae H
• 通讯作者: Harigae H

Monitoring CAR-T cells using flow cytometry: A feasibility study.

使用流式细胞术监测 CAR-T 细胞：可行性研究。

• 发表时间: 2021
• 作者: Fujiwara T;Onishi Y;Niizuma H;Okubo N;Sugawara S;Moriya K;Ichikawa S;Irie M;Fukuhara N;Yokoyama H;Fujiwara M;Fujimaki S;Sasahara Y;Harigae H.
• 通讯作者: Harigae H.

Cellular models of X-linked sideroblastic anemia based on immortalized human erythroid progenitors.

基于永生化人类红系祖细胞的 X 连锁铁粒幼细胞贫血细胞模型。

• 发表时间: 2021
• 作者: Ono K;Fujiwara T;Saito K;Suzuki C;Takahashi N;Kato H;Onodera K;Ichikawa S;Fukuhara N;Onishi Y;Yokoyama H;Nakamura Y;Harigae H.
• 通讯作者: Harigae H.