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ヒトiPS細胞を用いた自己免疫性下垂体疾患の病態解明

使用人类 iPS 细胞阐明自身免疫性垂体疾病的病理学

基本信息

批准号：
21K08555
负责人：
井口元三
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K08555/
关键词：
自己免疫性下垂体疾患 iPS細胞抗PIT-1下垂体炎

项目摘要

本研究では、ヒトiPS細胞と腫瘍免疫の技術を応用し、アンメット・メディカル・ニーズが高い自己免疫性下垂体疾患の病態解明のための疾患モデルを確立する。さらに、原因となる普遍的メカニズムの特定を通じて、新たな診断法および治療法の開発に繋げることを目指す。Step①：患者由来のiPS細胞（AP01株）から下垂体組織を生成し、ターゲット抗原蛋白PIT-1の制御下でGFPレポーターを発現するiPS細胞を使用して、標的組織としての下垂体細胞の収集効率を向上させた。Step②：患者由来の抗原特異的キラーT細胞の生成と再活性化のステップ。患者の末梢血からリンパ球を抽出し、マグネテックビーズを用いて制御性T細胞（T-reg）を除去。次に、抗原認識部位であるエピトープの近傍の複数ペプチドでリンパ球を刺激し、特異的キラーT細胞を選別。キラーT細胞の特異的反応を確認した後、IFN-γ ELISpot解析により抗原特異的反応性を確認。さらに、FACS・セルソーターを用いて、T細胞の活性化および細胞傷害指標であるCD137（4-1BB）およびCD107aをマーカーとしてクローン化を行い、細胞障害性の高い候補クローンであるVβ7.1クローンを中心に解析を進めた。Step③：in vitro 再構成疾患モデルの確立と病態解析。ステップ①で生成された患者由来iPS細胞からの下垂体組織と、ステップ②でクローン化された患者由来抗原特異的キラーT細胞を共培養することにより、自己免疫疾患（抗PIT-1下垂体炎）のin vitro疾患モデルの確立に成功した。本年度は、確立されたin vitro再構成モデルを用いて、自己免疫性下垂体疾患の病態解析および創薬スクリーニングを行った。

This study established the pathophysiology of high immune pituitary diseases by using iPS cells and tumor immunity techniques. For example, the common causes of disease, the specific conditions of disease, the development of new diagnostic methods, and the development of treatment methods. Step①: iPS cells (AP01 strain) from patients were used to produce pituitary tissue, control the expression of antigen protein PIT-1 and control the expression of GFP protein. The target tissue was used to increase the collection rate of pituitary cells. Step 2: Generation and reactivation of patient-derived antigen-specific T cells. The patient's peripheral blood cells were extracted and treated with T-reg. Second, antigen recognition sites are selected from multiple sites near the site, and specific T cells are selected for stimulation. After confirmation of antigen-specific response of T cells, antigen-specific response was confirmed by IFN-γ ELISpot analysis. In addition, FACS analysis, activation of T cells and cell injury indicators, CD137 (4-1BB) and CD107a analysis, and central analysis of cell injury candidates. Step 3: in vitro reconstruction of disease, establishment and pathological analysis. We successfully established a new type of immune disease (anti-PIT-1 pituitary inflammation) in vitro by co-culturing patient-derived antigen-specific T cells from iPS cells. This year, we have established a new method for the analysis of immune pituitary diseases.

项目成果

期刊论文数量（20）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

自己免疫性下垂体炎の新たな展開　疾患iPS細胞を用いた自己免疫性下垂体疾患のin vitro疾患モデルの樹立

自身免疫性垂体炎研究新进展：利用iPS细胞建立自身免疫性垂体疾病体外疾病模型

DOI：
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
0
作者：
蟹江慶太郎;伊藤剛;井口元三;松本隆作;浦井伸;坂東弘教;山本雅昭;福岡秀規;小川渉;金子新;高橋裕
通讯作者：
高橋裕

Responsiveness to DDAVP in Cushing’s disease is associated with USP8 mutations through enhancing AVPR1B promoter activity

DOI：
10.1007/s11102-022-01220-4
发表时间：
2022-04
期刊：
Pituitary
影响因子：
3.8
作者：
Hiroki Shichi;H. Fukuoka;Maki Kanzawa;Masaaki Yamamoto;Naoki Yamamoto;Masaki Suzuki;Shin Urai;R. Matsumoto;Keitaro Kanie;Y. Fujita;H. Bando;G. Iguchi;N. Inoshita;S. Yamada;Yutaka Takahashi;Wataru Ogawa
通讯作者：
Hiroki Shichi;H. Fukuoka;Maki Kanzawa;Masaaki Yamamoto;Naoki Yamamoto;Masaki Suzuki;Shin Urai;R. Matsumoto;Keitaro Kanie;Y. Fujita;H. Bando;G. Iguchi;N. Inoshita;S. Yamada;Yutaka Takahashi;Wataru Ogawa

重症筋無力症を合併した抗PIT-1下垂体炎の1例

抗PIT-1垂体炎并发重症肌无力1例