肺がんにおける癌関連遺伝子MYNNとp53の相互制御機構の解明

阐明肺癌相关基因MYNN和p53的相互调控机制

• 批准号: 21K08668
• 负责人: 伊藤 佐智夫
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Okayama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K08668/
• 关键词: MYNN; myoneurin; p53; microRNA; Lung cancer; 肺癌; BTB/POZ; 発癌機構

これまでに申請者は、マウス尾静脈接種実験を行いMYNN過剰発現細胞において肺への癌細胞の浸潤および定着が亢進すること、MYNN発現抑制細胞おいて浸潤および定着が抑制されることを発見した。p53の活性化によりMYNNタンパク質量が減少すること、逆にMYNNを過剰発現させることでp53およびp21が減少することを確認した。MYNN抗体を用いたクロマチン免疫沈降 (ChIP)では、MYNNがp21を含めいくつかのp53標的遺伝子の調節領域に結合することを発見した。 p53の過剰発現に伴いMYNN mRNAは僅かながら減少がみられたため、MYNNの調節領域・遺伝子領域に存在するp53レスポンスエレメント (p53RE)を同定した。それらp53RE配列を用いてルシフェラーゼレポーターアッセイを行った結果、コントロールと比較しても有意差は確認されなかったが、再検証を行う。また、p53活性化に伴い発現誘導されるmicroRNA (miRNA)をMYNN mRNA-3’UTR上に同定したことから、p53活性化後にmiRNAの発現亢進とMYNNタンパク質発現低下を検証した。miRNA発現にともないMYNNタンパク質の減少が確認されたことから、p53はmiRNAを介してMYNNの発現調節をしていることが明らかとなった。ルシフェラーゼおよびGFPレポーターアッセイを用いたmiRNAの機能解析においてもMYNN-3'UTR内の配列が標的配列になっていることが証明された。またMYNN過剰発現細胞株とコントロール細胞株のRNA-SEQ解析では、MYNNがPI3Kを介する幾つかの反応経路に関与していることが示唆されたため、引き続き解析を行う。

This is the first time that the applicant has been inoculated with MYNN in the tail vein. MYNN has been found to inhibit the infiltration of cancer cells in the lung. The activation of p53 and the reduction of MYNN mass were confirmed. MYNN antibodies are used in immunoprecipitation (ChIP), and MYNN p21 contains p53 target proteins that bind to the regulatory domain. MYNN mRNA expression in p53 is associated with a decrease in MYNN regulatory domain and a decrease in MYNN regulatory domain. P53RE is used to verify the results of the test and to verify the results. MicroRNA (miRNA) expression induced by p53 activation is also detected in MYNN mRNA-3 'UTR. MiRNA expression is regulated by the presence of p53 miRNA, which is identified as a decrease in MYNN expression. The functional analysis of miRNA in MYNN-3'UTR was proved by the analysis of miRNA in MYNN-3'UTR. In addition, RNA-SEQ analysis of the MYNN over-discovery cell line and the Kontorokari cell line is related to the reverse osmosis of MYNN through PI3K.