同種異系iPS心筋細胞移植治療に対するiPS間葉系幹細胞を用いた免疫抑制法の開発
开发使用 iPS 间充质干细胞进行同种异体 iPS 心肌细胞移植治疗的免疫抑制方法
基本信息
- 批准号:21K08862
- 负责人:
- 金额:$ 2.66万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
- 财政年份:2021
- 资助国家:日本
- 起止时间:2021-04-01 至 2024-03-31
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
昨年度にiPS細胞からbFGF依存性分化誘導法によりiPS細胞由来間葉系幹細胞(iMSC)を作製し、典型的なMSCの細胞表面マーカー(CD73、CD90、CD105、CD29、CD44、CD146など)の発現、骨芽細胞・軟骨細胞・脂肪細胞の3系統への分化能を確認した。本年度はin vitroとin vivoでiMSCの免疫制御作用を検討した。in vitroでは、T細胞活性化と細胞傷害性を評価した。前者は、Carboxyfluorescein Succinimidyl Ester (CFSE) で標識した健常人ドナー由来Tリンパ球を共刺激用抗体(抗CD3抗体および抗CD28抗体)で共刺激し、positive controlである骨髄由来間葉系幹細胞(BM-MSC)もしくはiMSCと混合比率を変えて培養した結果、BM-MSCと同様にiMSCの容量依存的にTリンパ球の増殖が抑制された。細胞傷害性は、NK細胞(Effector細胞)とCellTrace Violet染色したK562細胞(標的細胞)、BM-MSCもしくはiMSCを混合培養し、標的細胞の細胞死を評価した。BM-MSCと同様にiMSCはEffector細胞による標的細胞への細胞障害性を抑制した。In vivoでは、他家移植による免疫拒絶反応の抑制を評価した。ヒト末梢血単核球を投与してもgraft-versus host disease(GVHD)が起きにくいとされるMHC class I/II-deficient NOGマウス (NOG-dKO) を用いて免疫系ヒト化マウスを作製し、iPS細胞由来心筋細胞のみの皮下移植に比べてiMSCと同時移植により免疫拒絶反応が抑制され、移植片の生着が延長するかを検証する。現在、免疫系ヒト化マウスを作製するためにNOG-dKOへのPBMCの投与量、投与回数などを検討している。
In the past year, iPS cells were induced from mesenchymal stem cells (iMSC) by bFGF dependent differentiation induction method, and the development of typical MSC cell surface cells (CD73, CD90, CD105, CD29, CD44, CD146) was confirmed. This year, the immunosuppressive effect of iMSC was investigated in vitro and in vivo. In vitro, T cell activation and cell injury evaluation In contrast, Carboxyfluorescein Succinimidyl Ester (CFSE) was identified as a costimulatory antibody (anti-CD3 antibody and anti-CD28 antibody) for T-cells in healthy individuals, and positive control was observed for BM-MSCs in culture. In contrast, BM-MSCs were identified as a capacity-dependent inhibition of T-cell proliferation. Cell toxicity, NK cells (Effector cells), CellTrace Violet staining, K562 cells (target cells), BM-MSC, iMSC mixed culture, target cells and cell death evaluation BM-MSC and iMSC inhibit the cellular damage of target cells in Effector cells In vivo, immune rejection and inhibition of transplantation in other families are evaluated. The administration of peripheral blood mononuclear cells and the initiation of graft-versus host disease (GVHD) include MHC class I/II-deficient NOG (NOG-dKO) and the use of immune systems to control it. iPS cells are derived from subcutaneous transplantation of cardiac muscle cells compared with iMSC and simultaneous transplantation. Now, the immune system can be controlled by NOG-dKO and PBMC dose, dose and return time.
项目成果
期刊论文数量(0)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
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