同種異系iPS心筋細胞移植治療に対するiPS間葉系幹細胞を用いた免疫抑制法の開発

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昨年度にiPS細胞からbFGF依存性分化誘導法によりiPS細胞由来間葉系幹細胞（iMSC）を作製し、典型的なMSCの細胞表面マーカー（CD73、CD90、CD105、CD29、CD44、CD146など）の発現、骨芽細胞・軟骨細胞・脂肪細胞の3系統への分化能を確認した。本年度はin vitroとin vivoでiMSCの免疫制御作用を検討した。in vitroでは、T細胞活性化と細胞傷害性を評価した。前者は、Carboxyfluorescein Succinimidyl Ester (CFSE) で標識した健常人ドナー由来Tリンパ球を共刺激用抗体（抗CD3抗体および抗CD28抗体）で共刺激し、positive controlである骨髄由来間葉系幹細胞（BM-MSC）もしくはiMSCと混合比率を変えて培養した結果、BM-MSCと同様にiMSCの容量依存的にTリンパ球の増殖が抑制された。細胞傷害性は、NK細胞（Effector細胞）とCellTrace Violet染色したK562細胞（標的細胞）、BM-MSCもしくはiMSCを混合培養し、標的細胞の細胞死を評価した。BM-MSCと同様にiMSCはEffector細胞による標的細胞への細胞障害性を抑制した。In vivoでは、他家移植による免疫拒絶反応の抑制を評価した。ヒト末梢血単核球を投与してもgraft-versus host disease（GVHD）が起きにくいとされるMHC class I/II-deficient NOGマウス (NOG-dKO) を用いて免疫系ヒト化マウスを作製し、iPS細胞由来心筋細胞のみの皮下移植に比べてiMSCと同時移植により免疫拒絶反応が抑制され、移植片の生着が延長するかを検証する。現在、免疫系ヒト化マウスを作製するためにNOG-dKOへのPBMCの投与量、投与回数などを検討している。