HPV E7 mRNA特異的機序を標的とする新規子宮頸癌予防・治療法の開発

针对HPV E7 mRNA特异性机制开发新型宫颈癌预防和治疗方法

• 批准号: 21K09464
• 负责人: 秋山 梓
• 金额: $ 2.5万
• 依托单位: University of Tsukuba
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2026-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K09464/
• 关键词: 子宮頸癌; ヒトパピローマウイルス; E7蛋白

HPVウイルスゲノムは6つの初期遺伝子を有し、そのうちE6とE7遺伝子は、それぞれ癌抑制蛋白p53およびRbを不活性化し癌化を引き起こす。正常細胞がHPVに感染すると、E6, E7遺伝子の発現増加によって、異形成へ進展する。さらにHPV DNAが染色体に組み込まれると、E６、E7遺伝子が恒常的に高発現し、分化・アポトーシスの抑制、異常増殖、形質転換などが起き、高度異形成となる。さらに遺伝子変異が蓄積すると、浸潤癌へと進展する。2021年度までに、HPV16陽性CaSki細胞およびHPV18陽性HeLa細胞へ遺伝子特異的siRNAをトランスフェクションすることにより、E6および/またはE7癌遺伝子をノックダウンし、Microarrayによる遺伝子発現解析を行った。ウェスタンブロットにより蛋白発現の解析、Colony formation assayにより細胞増殖の解析、フローサイトメトリーにより細胞周期の解析、TUNEL assayによりアポトーシスの解析、Wound healing assayにより細胞移動能の解析、Transformation assayにより足場非依存性細胞増殖を解析した。E6およびE7遺伝子ノックダウンによりそれぞれ異なる細胞機能への影響が観察され,E7特異的シグナル経路間相互作用の中でG1細胞周期アレストが最も中心的経路であることを見出した。今後更にE6特異的発現変動遺伝子を抽出し、E7に関する結果と比較することにより、より高悪性度の子宮頸癌発癌機序の解明に繋がると考えられる。

HPV infection is caused by the inactivation of tumor suppressor protein p53 and Rb. HPV infection in normal cells, increased development of E6 and E7 genes, and progression of heterogenesis. HPV DNA is present in the genome, E6 and E7 genes are constantly present, differentiated, inhibited, abnormally propagated, morphologically altered, and highly heteromorphic. The tumor cells accumulate and the invasive cancer progresses. In 2021, HPV16-positive CaSki cells and HPV18-positive HeLa cells were used to analyze the expression of virus-specific siRNAs in E6 and E7 oncogenes. Analysis of protein production, analysis of Colony formation assay, analysis of cell cycle, analysis of TUNEL assay, analysis of cell mobility, analysis of Transformation assay, analysis of field-independent cell proliferation. E6 and E7 genes were used to investigate the effects of different cell functions, and E7-specific interactions among the G1 cell cycle pathways were found to be most central. In the future, E6-specific gene expression vector was extracted, E7-related results were compared, and the mechanism of cervical cancer development with high specificity was investigated.

项目成果

Microarray and bioinformatics analyses of HPV oncogene E6-specific pathways in cervical carcinogenesis

HPV癌基因E6特异性通路在宫颈癌发生过程中的微阵列和生物信息学分析

• 发表时间: 2023
• 作者: Reina Komatsu;Ryu Matsuoka;Rina Aoyama;Akira Sakai;Shunzaburo Ono;Tatsuya Arakaki;Mayumi Tokunaka;Suguru Yasutomi;Naoaki Harada;Kazuki Iwamoto;Masaaki Komatsu;Ryuji Hamamoto;Akihiko Sekizawa;Masatoki Kaneko;チ ナン
• 通讯作者: チ ナン