新規難聴原因遺伝子SLC12A2の分子病態解析と治療標的の探索

新型致聋基因SLC12A2的分子病理分析及治疗靶点的寻找

• 批准号: 21K09598
• 负责人: 務台 英樹
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: 独立行政法人国立病院機構(東京医療センター臨床研究センター)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K09598/
• 关键词: 難聴; 原因遺伝子; ゲノム編集; 疾患モデル動物; 網羅的発現遺伝子解析; スプライシング; モデル動物; 相互作用分子

本研究の目的は、代表者が同定・報告した新規難聴原因SLC12A2のモデルマウスの病態解析を通じて、本遺伝子が真の難聴原因であることを証明することである。令和4年度は、前年度に引き続き、Slc12a2 exon 21スプライス変異を導入したマウス2系統（Em1, Em2と称する）のうちEm2系統蝸牛における網羅的発現遺伝子解析を実施した。難聴を示すEm2/Em2および聴力正常の野生型ホモ4週齢のマウス各3頭より全蝸牛組織から抽出した高品質total RNAを用い、文部科学省先進ゲノム支援の助成を得てRNA-sequencingを実施し、Em2/Em2蝸牛において発現量が野生型の2倍以上となる142遺伝子、半分以下となる554遺伝子を見出し、Gene Ontology解析も実施した。これらのうち複数の遺伝子産物について、実際にqRT-PCR法を用いて生後1日、12日、および4週齢における発現量を測定しEm2/Em2, Em2/+, および野生型蝸牛間で比較検討した。一部の遺伝子については免疫組織化学解析による検討を開始した。また、Em2系統と表現型 (ABR閾値) が異なり、導入された変異がEm2とわずかに異なるEm1マウス系統について、Slc12a2発現産物の解析を実施し、スプライシングアッセイ用のベクターを作成し解析を実施した。さらに、以前に作成したヒトゲノムを用いたスプライシングアッセイ用ベクターの結果とも比較した。これにより、exon 21アクセプターサイト上の塩基配列の差異がスプライシングに与える影響を及ぼすことが明らかとなった。脊椎動物100種類における、Slc12a2のexon 21スプライシング領域塩基配列との比較検討も実施した。

The purpose of this study is to identify and report the causes of new difficulties in SLC12A2, and to demonstrate the causes of new difficulties in SLC12A2. The analysis of the occurrence of snails in the Em2 system was carried out in the previous year. It is difficult to show that the Em2/Em2 ratio is higher than that of the wild type, and the total RNA of the whole snail tissue is extracted from the whole snail tissue at the age of 4 weeks. The Ministry of Education, Culture, Sports, Science and Technology has advanced support for RNA-sequencing. The number of Em2/Em2 snails detected in the wild type is more than twice that of the wild type, and the number of Em2/Em2 snails detected in the wild type is less than half that of the wild type. Gene Ontology analysis is carried out. The amount of Em2/Em2, Em2/+, and Em2/+ were measured by qRT-PCR at 1 day, 12 days, and 4 weeks after birth. A part of the DNA was detected by immunohistochemical analysis. The analysis of Em2 system and phenotype (ABR threshold value) is carried out, and the analysis of Em2 system and phenotype (ABR threshold value) is carried out. In the past, we have made a comparison between the results of the study and the results of the study. The difference in the base arrangement on the web site is due to the influence of the web site on the web site and the web site. A comparative study of 100 vertebrate species, including 12a2 and 21 species, was conducted.

项目成果

Pax3ノックアウトマウスの蝸牛解析

Pax3 敲除小鼠的耳蜗分析

• 发表时间: 2022
• 作者: 宇田川友克;高橋恵理沙;小島博己;務台英樹;松永達雄
• 通讯作者: 松永達雄

難聴の原因として報告されたミトコンドリア遺伝子変異に対する国際基準を用いた評価

使用国际标准对报告为听力损失原因的线粒体基因突变进行评估

• 发表时间: 2022
• 作者: 奈良清光;務台英樹;瀧口哲也;守本倫子;仲野敦子;有本友季子;森田訓子;南修司郎;加我君孝;松永達雄
• 通讯作者: 松永達雄

Whole exome analysis of patients in Japan with hearing loss reveals high heterogeneity among responsible and novel candidate genes.

• DOI: 10.1186/s13023-022-02262-4
• 发表时间: 2022-03-05
• 期刊: Orphanet journal of rare diseases
• 影响因子: 3.7
• 作者: Mutai H;Momozawa Y;Kamatani Y;Nakano A;Sakamoto H;Takiguchi T;Nara K;Kubo M;Matsunaga T
• 通讯作者: Matsunaga T

当院を受診した難聴者に対する遺伝子診断と遺伝カウンセリングの現況

我院就诊听力障碍患者的基因诊断及遗传咨询现状

• 发表时间: 2021
• 作者: 井上 沙聡;奈良 清光;務台 英樹;南 修司郎;加我 君孝;和佐野 浩一郎;松永 達雄
• 通讯作者: 松永 達雄

Clinical and genetic analysis of children with hearing loss and bilateral enlarged vestibular aqueducts

双侧前庭导水管扩大的听力损失儿童的临床及遗传分析

• DOI: 10.1016/j.ijporl.2021.110975
• 发表时间: 2022
• 期刊: International Journal of Pediatric Otorhinolaryngology
• 影响因子: 1.5
• 作者: Nakano Atsuko;Arimoto Yukiko;Mutai Hideki;Nara Kiyomitsu;Inoue Satomi;Matsunaga Tatsuo
• 通讯作者: Matsunaga Tatsuo