視細胞変性のオンセットと進展制御に関わる網膜内炎症環境の時空的な解析

与感光细胞变性的发生和进展控制相关的视网膜内炎症环境的时空分析

• 批准号: 21K09693
• 负责人: 渡邉 すみ子
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K09693/
• 关键词: 網膜; 炎症; 変性; LC-MS; サイトカイン; マイクログリア; 視細胞

視細胞変性は、そのオンセットと進展に網膜内の炎症が深く関わることが示唆されている。我々は、マイクログリアに着目しその視細胞変性における役割を検討するために、誘導的／特異的にマイクログリアにv-Rasを発現することが可能なマウスを作成した。これまでのv-Rasで同様に活性化されているマイクログリアの状態が網膜内の位置によって変わることから、網膜内の微少な環境がマイクログリアの活性化状態に影響を与えていると言う仮説を立てた。網膜内の局所特異的なタンパク発現を明らかにするために、網膜の特定の領域をレーザーマイクロダイセクション(LMD)で切り出し、LC-MSによるタンパク質の同定を行い、病態の時間軸の進展におけるサイトカイン類の状態のダイナミズムについて４次元的に把握し、そこに不均一性があるのかどうかを検討することを第一の目的とし、LMDで網膜を切り出し、LC-MS でタンパク質の同定を行う手法で、網膜内の局所におけるタンパク質の発現パターンを解析することに成功した。これまで網膜をセルソーターで細胞種ごとに分離し、RNAseqで解析することを行ってきたが、プロセスを伸ばした網膜細胞が、タンパク質をどこで発現しているのか、という空間的情報を得る第一のステップであると考えている。正常状態、炎症初期における発現状態の違いについても解析が可能になった。一方で、マイクログリア、ミューラーグリア、神経細胞との相互作用について明らかにすることも本研究の課題であり、これらの細胞に加え血管系の細胞の変性網膜の病態進展の時間軸における状態について、検討を進めている。

已经提出，感光体退化与视网膜内炎症的发作和发展有关。我们创建了能够诱导/特异性地表达小胶质细胞上的V-RA的小鼠，以专注于小胶质细胞并检查它们在感光受体变性中的作用。自从在先前的V-RAS中激活的小胶质细胞状态根据视网膜内的位置而变化，我们假设视网膜内的微环境会影响小胶质细胞的活化状态。为了阐明视网膜内局部特异性蛋白的表达，主要目的是用激光显微解剖（LMD）消除视网膜的特定区域，使用LC-MS鉴定蛋白质，在四个维度中掌握病理学的时间轴中细胞因子状态的动态，并检查那里是否存在异质。我们使用一种使用LC-MS切除视网膜的方法，成功地分析了视网膜内局部蛋白质的表达模式。到目前为止，视网膜使用细胞分类器通过细胞类型分离并通过RNASEQ进行分析，但我们认为这是获取有关扩展过程的视网膜细胞在哪里表达蛋白质的空间信息的第一步。已经有可能分析正常状态和早期炎症状态的差异。另一方面，在这项研究中，阐明小胶质细胞，毛果和神经元之间的相互作用也是一个挑战，我们目前正在研究不仅这些细胞的状况，而且还研究了血管细胞中的视网膜病理进展，而且还在时间轴上。

项目成果

Histone H3K36 demethylase Fbxl11 plays pivotal roles in development of retinal late-born cell types

组蛋白 H3K36 去甲基化酶 Fbxl11 在视网膜晚生细胞类型的发育中发挥关键作用

• 发表时间: 2023
• 期刊: Genes to Cells
• 影响因子: 2.1
• 作者: Iwagawa;T.;Fukushima;M.;Takeuchi;S.;Kawamura;Y.;Aihara;Y.;Ozawa;M.;Ykushiji-Kaminatsui;N.;Aihara;M.;Koseki;H.;Suzuki;Y.;Watanabe;S.
• 通讯作者: S.

UCSF(米国)

加州大学旧金山分校（美国）