Development of neuroprotective therapy targeting retinal glial cells

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8週齢の野生型マウスとNrf2ノックアウト（KO）マウスにロテノン（30mg/kg）または0.5 % carboxymethyl cellulose（コントロール）を30日間経口投与し、酸化ストレスマーカー8-OHdGを使用した免疫染色、網膜神経節細胞（RGC）数計測、網膜RT-PCR、グリア細胞の免疫染色を施行した。生後5-8日の野生型及びNrf2 KOマウスからミュラー細胞を調製しロテノン（3-100 μM）投与下の細胞生存率と活性酸素分子種（ROS）量をalamarBlue assay、CellROX Green染色で調べた。ロテノン30 &#181;M下の神経栄養因子の遺伝子発現を時間毎にリアルタイムPCRで検討した。野生型・Nrf2KOマウスともロテノン投与群ではコントロールと比べ8-OHdG陽性細胞数の増加を認めたが（P=0.02, P=0.02）、RGC数では有意差を認めなかった。RT-PCRではロテノンを投与したNrf2 KOマウス群において、野生型と比較してGFAP、vimentinの発現上昇を認め（P=0.02, P < 0.01）、免疫染色ではGFAPのシグナル増強を認めた。野生型と比較しNrf2 KOマウスのミュラー細胞の生存率はロテノン存在下で有意に低く（P < 0.05）、ロテノン30、100 &#181;M下のミュラー細胞内ROSは有意に増加した（P < 0.05)。また、ロテノン投与6、24時間後のNrf2 KOマウスのミュラー細胞において神経栄養因子（BDNF、bFGF）の有意な発現上昇を認めた (P < 0.05)。以上よりロテノン存在下、Nrf2 KOマウスのミュラー細胞では神経栄養因子の発現が増強され、神経保護に寄与することが示唆された。