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転移性口腔癌細胞を用いた鶏卵漿尿膜移植法の確立と治療標的分子の同定

转移性口腔癌细胞鸡蛋绒毛尿囊膜移植方法的建立及治疗靶分子的鉴定

基本信息

批准号：
21K09862
负责人：
櫻井浩平
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Fujita Health University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K09862/
关键词：
口腔癌転移鶏卵漿尿膜移植法遺伝子発現ネットワーク解析

项目摘要

転移は口腔癌の予後不良因子である。多段階からなるステップを経て成立する転移を解析するためには、癌進展を模倣した「癌細胞モデル」と「動物実験モデル」が必要である。本研究は癌細胞モデルとして高転移能を有する口腔癌細胞株を使用し、転移に関与する遺伝子の発現・ネットワークを解析する。また動物実験モデルとして、鶏卵漿尿膜移植法（Chorioallantoic Membrane Assay: CAM assay）を確立する。本研究は、これらの癌細胞モデルと動物実験モデルを組み合わせて口腔癌転移の治療標的分子の同定を目指す。前年度は、口腔癌細胞株であるHSC-3細胞とHSC-3-M3細胞を用いてCAM assayを行い、移植部の漿尿膜（CAM）上に腫瘍が形成されることを確認した。今年度は、高転移能株HSC-3-M3細胞がニワトリ胚へ転移するかどうか検証した。CAM上に細胞を移植して8日目にニワトリ胚の肝臓と肺を摘出し、病理組織学的に検索した。肝臓のHE染色標本において、ごく少数ではあるがHSC-3-M3細胞と思われる細胞が観察された。そこで免疫染色を行うために連続切片を作製したが、対象の細胞が消失し検索することが困難となった。全ての検体（肝臓、肺）でCK5の免疫染色を施行したが、HSC-3-M3細胞は認められなかった。CAM上への移植だけでなく、CAMの血管に直接、癌細胞株を移植する実験を行っているところである。前年度までにHSC-3細胞とHSC-3-M3細胞のトランスクリプトームの比較解析は終了していた。本年度は発現変動遺伝子の中から、転移に重要と思われる遺伝子を数個選択しRT-PCRで遺伝子発現を測定した。

The negative factors after oral cancer are transferred. Multi-stage analysis is necessary to simulate cancer progression and animal progression. This study analyzed the development and growth of oral cancer cell lines with high migration potential. The Chorioallantoic Membrane Assay (CAM assay) was established in animals. This study aims to identify the molecular identity of the therapeutic target for oral cancer metastasis in animals and animals. In the past year, HSC-3 cells and HSC-3-M3 cells were used in CAM assay, and tumor formation in serum-urinary membrane (CAM) of transplantation site was confirmed. This year, the highly competent strain HSC-3-M3 cells were found to be highly susceptible to embryonic migration. CAM cell transplantation was performed on the 8th day after transplantation, and the liver and lung tissues were extracted. HE staining of liver cells, a small number of HSC-3 cells It's difficult to make immunostaining sections, but it's not easy to make them disappear. Immunostaining of CK5 in whole tissues (liver, lung) and HSC-3-M3 cells was performed. CAM transplantation, CAM vascular transplantation, cancer cell transplantation The comparative analysis of HSC-3 cells and HSC-3-M3 cells in the previous year has been completed. This year, several selected RT-PCR assays were performed to detect the presence of active genes.