周波数制御式反復微細振動(FRMV)による神経細胞分化誘導とその分子的機序の検討

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我々は最近、神経細胞分化モデル・ラットPC12細胞やその派生株(PC12-P1F1細胞)ならびに骨芽細胞分化モデル・マウスMC3T3-E1細胞に対し、周波数制御式反復微細振動(FRMV)依存的に神経細胞分化や骨芽細胞分化を誘導する方法を相次いで考案した。しかし、その分子的なメカニズムは依然その多くが不明であった。そこで本年度研究では、FRMVの汎用性の検討の観点から、(1)骨芽細胞分化誘導機構や(2)温度制御式反復刺激(TRTS)による神経細胞分化誘導機構のさらなる解明を目指した以下の検討を行った。[方法]骨芽細胞分化誘導については、MC3T3-E1細胞を播種したプレートを微細振動度装置にセットし、当該細胞に対する刺激条件を微調整しながら、その分子的なメカニズムや分化誘導効率がより高まる条件等を評価した。骨芽細胞分化の程度の定量評価には、主にアルカリホスアターゼアッセイを用いた。またPC12-P1F1細胞の神経細胞分化誘導については従来の方法で行い、さらにRT-PCR法等により遺伝子発現により着目した検討を行った。[成果]MC3T3-E1細胞を用いた実験系では、BMPシグナル伝達経路の阻害剤の一つであるLDN193189等を使用すること等により、FRMV依存的な骨芽細胞分化におけるBMPシグナル伝達経路の重要性が示唆された。また、PC12-P1F1細胞については、SR600125が神経細胞分化率を向上させる機序について、神経細胞分化マーカー遺伝子や細胞内シグナル分子を規定する遺伝子を含む様々な遺伝子の発現レベルへの影響が新たに得られた。