骨膜におけるF-boxタンパク質FBXW2の骨誘導能に関する検証

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従来、骨再生プロセス解明のための研究で、F-Box and WD-40 Domain-Containing Protein 2 (FBXW2)が骨膜内の骨形成層において発現し、in vitroでは、骨膜由来細胞の初代培養の際にオステオカルシン発現との関連性を示すことを報告してきた。当該年度においては、FBXW2と弾性線維との関連性を明らかにした。ウシ骨膜および血管の弾性線維をエラスチカワンギーソン染色にて観察し、FBXW2抗体を用いた免疫染色画像と比較した結果、弾性線維が存在している部位とFBXW2が発現している部位は類似していた。次に弾性線維の構成成分であるエラスチンの免疫染色を行い、二重免疫染色法にてFBXW2と比較した結果、エラスチンの発現部位はFBXW2の発現部位に近似しているものの、完全には一致しないことが分かった。これらの結果から、本研究で用いたエラスチンおよびFBXW2抗体は２つのタンパク質を異なるタンパク質として特異的に認識しており、FBXW2は弾性線維の構成成分であると断定は出来ないものの、弾性線維にassociateしているタンパク質であることが明らかになった。研究課題に掲げたFBXW2以外にも骨膜由来細胞に関与するＦボックスタンパク質がある。F-box/leucine-rich repeat protein 14 (FBXL14) である。初代培養時に、FBXW2がオリジナル組織である骨膜において発現しているのに対し、FBXL14は骨膜から派生した骨膜由来細胞において発現している。培養液の条件をアスコルビン酸添加、無添加の２条件に分け、骨膜由来細胞の免疫染色を行った結果、細胞が多層構造を示したアスコルビン酸添加条件において、FBXL14は膜状の構造体をつくり、細胞を支持していることがわかった。