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細胞外環境、細胞接着および血管新生による新しい骨再生モデルの解析

基于细胞外环境、细胞粘附和血管生成的新型骨再生模型分析

基本信息

批准号：
18791465
负责人：
秋山真理
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Osaka Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

組織再生のプロセスを明らかにすることを目的として、牛骨膜細胞を用いた骨再生モデルにおいて細胞外環境、細胞接着、血管新生の3点の観点から研究を行った。まず、細胞外環境を調べるために培養細胞の上清を採取し、沈澱させて得たタンパク質を用いてウエスタンブロット法にて目的とするタンパク質の検出を行った。その結果、培養液にアスコルビン酸を添加した場合、培養上清にはプロコラーゲンタイプ1およびコラーゲンタイプ1の両方が含まれていることが明らかになった。しかし、アスコルビン酸無添加では、これらのタンパク質のバンドを検出できなかった。次に細胞接着と骨再生の関連性を調べるため、培養細胞をヌードマウス皮下に移植した。アスコルビン酸添加条件で培養した骨膜細胞では生体内で骨組織の形成が認められたのに対して、アスコルビン酸無添加条件では細胞を支持する細胞外マトリックスがないため、細胞同士の結合が弱く、移植部が消失し、骨組織も認められなかった。以上の結果から、骨膜細胞によるコラーゲン合成と生体内での骨再生には関連性があることが示唆された。さらに、培養上清を生体内における組織再生の予測に使用できる可能性も示された。最後に骨再生モデルにおける血管新生の過程を、マウスと牛とで異なる染色挙動の血管内皮細胞マーカーを用いて調べた。すなわち、Von Willebrand因子抗体はマウスおよび牛に交差反応を示すが、CD31抗体は牛に交差反応を示さず、マウスのみで発現する。ヌードマウス皮下で、牛骨膜細胞による骨再生が認められた組織切片をVon Willebrand因子抗体およびCD31抗体で免疫染色を行った結果、両抗体で発現が認あられた。したがって、本研究における動物モデルでは、血管新生は宿主側のヌードマウスに由来することが示唆された。

The purpose of tissue regeneration and bovine periosteal cell regeneration were studied. The extracellular environment, cellular connection and angiogenesis were studied at 3 o'clock. In the extracellular environment, the supernatant of the cell was collected, and the supernatant was collected in the extracellular environment, and the supernatant was collected in the extracellular environment, and the supernatant of the cell was collected. The results of the test, the culture liquid, the liquid, the supernatant, the supernatant and the supernatant. Please tell me what to do, and let's see if you want to add something to it. The secondary cells were followed by bone regeneration, connection, and culture of the cells. The periosteal cells were cultured to form the bone tissue in vivo to form the bone tissue, and the conditioned cells were added to support the extracellular cycle, the combination of the same cell and the weakness, the disappearance of the transplant, and the bone tissue. The results above show that the periosteal cells have been synthesized and the bone regeneration has been linked to the bone regeneration in vivo. The tissue regeneration of the supernatant in vivo was used to show the possibility of the use of the drug. In the end, bone regeneration was used to detect the process of angiogenesis, and the endothelial cells were stained for vascular endothelial cell proliferation. Von Willebrand factor antibody, cow antibody, CD31 antibody, cow, antibody, antibody. The Von Willebrand factor antibody and CD31 antibody immunostaining were performed in the tissue sections of subcutaneous and bovine periosteal cells, bone regeneration and bone regeneration. In this study, the animals were infected, and the host host was implicated in angiogenesis.